[發明專利]一種卡馬西平人工抗原的合成方法

在審

• 申請號: 201910019175.X
• 申請日: 2019-01-09
• 公開（公告）號: CN109678947A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 胥傳來;周升陽;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/107;C07D223/22
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

1.一種卡馬西平人工抗原的合成方法，其特征在于：由亞氨基芪甲酰氯與4-氨基丁酸甲酯鹽酸鹽反應得到具有羧基的產物，即半抗原CBZ，用碳二亞胺法將半抗原CBZ與載體蛋白偶聯，即得到卡馬西平人工抗原。

2.根據權利要求1所述卡馬西平人工抗原的合成方法，其特征在于具體步驟如下：

（1）半抗原CBZ的合成：

合成路線如下：

將化合物1 亞氨基芪甲酰氯22.20mmol溶于四氫呋喃50.0mL溶液中，加入4-氨基丁酸甲酯鹽酸鹽22.20mmol和三乙胺66.83mmol，將反應在室溫下攪拌并回流過夜；用乙酸乙酯萃取混合物，得到化合物2；

將化合物2 5.95mmol溶于THF / H₂O 10.0mL溶液中，加入LiOH 15.0mmol，在室溫下反應過夜；將混合物用1N鹽酸調節pH至3，過濾并濃縮，得到目標化合物半抗原CBZ；

（2）完全抗原的制備：將步驟（1）制備所得半抗原CBZ與BSA偶聯得到偶聯物完全抗原CBZ-BSA；或與KLH偶聯得到偶聯物完全抗原CBZ-KLH；CBZ-BSA和CBZ-KLH即為卡馬西平人工抗原。

3.根據權利要求2所述卡馬西平人工抗原的合成方法，其特征在于：所述完全抗原CBZ-BSA制備方法如下：

a、稱取8.9 mg CBZ，1-乙基碳二亞胺鹽酸鹽16.23 mg，N-羥基琥珀酰亞胺8.8mg，用600μL無水N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到A液，室溫攪拌反應4-6h；稱取牛血清蛋白BSA，加入等體積硼酸緩沖溶液，得到B液；

在室溫條件下逐滴將A液加入到B液中，室溫反應過夜，即得偶聯物CBZ-BSA混合液；

b、透析：取8cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去離子水沖洗3min，保存在4℃去離子水中備用；將步驟a所得偶聯物CBZ-BSA混合液放入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天三次換液，即得完全抗原CBZ-BSA。

4.根據權利要求3所述卡馬西平人工抗原的合成方法，其特征在于：步驟a所述CBZ與BSA摩爾比為30:1。