[發(fā)明專利]大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910015538.2
• 申請日: 2019-01-08
• 公開（公告）號: CN109628392A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段莉;王大平;梁宇杰;徐曉;李興福;歐陽侃
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市第二人民醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京匯捷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 馬金華

1.大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：該方法包括以下步驟：

S1：獲取細(xì)胞沉淀，首先抽取病人膝關(guān)節(jié)積液，離心獲得細(xì)胞沉淀，留取備用；

S2：培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，在符合GMP的要求下利用無血清培養(yǎng)基對人關(guān)節(jié)來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，留取備用；

S3：生物反應(yīng)器的預(yù)處理，將生物反應(yīng)器清洗干凈，然后風(fēng)干，留取備用；

S4：接種培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，將人關(guān)節(jié)液來源的間充質(zhì)干細(xì)胞接種到微載體上，進(jìn)行三維(3D)細(xì)胞培養(yǎng)，生物反應(yīng)器的外部培養(yǎng)瓶不間斷地提供細(xì)胞養(yǎng)分，細(xì)胞通過分子量截留膜和微載體保留于細(xì)胞生物反應(yīng)室中；

S5：培養(yǎng)獲得外泌體，對S4中得到的上清液進(jìn)行差異超速離心分離獲取外泌體，并進(jìn)行洗滌步驟從培養(yǎng)上清液中富集純凈的外泌體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：所述步驟S2中，無血清培養(yǎng)基和試劑被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物細(xì)胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：所述步驟S3中，生物反應(yīng)器是指利用自然存在的微生物或具有特殊降解能力的微生物接種至液相或固相的反應(yīng)系統(tǒng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：所述步驟S5中，對S4中得到的上清液進(jìn)行差異超速離心處理所使用的是離心機(jī)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：所述離心機(jī)的類型分為：超高速離心機(jī)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：所述步驟S2中，間充質(zhì)干細(xì)胞從細(xì)胞沉淀中提取。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大規(guī)模生產(chǎn)符合GMP規(guī)范的臨床級外泌體，其特征在于：所述步驟S3中，生物反應(yīng)器清洗10-15分鐘即可。