[發明專利]檢測樣本中BAALC基因相對表達量的引物、探針及方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201910011711.1
• 申請日: 2019-01-07
• 公開（公告）號: CN109652510A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 王淑一;吳鵬飛
• 申請（專利權）人: 福州艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

1.用于BAALC基因相對表達量的引物和探針，其特征在于，所述引物和探針包括：

(1)檢測BAALC基因的上游引物BAALC-F、下游引物BAALC-R和探針BAALC-Probe，

BAALC-F：AGTCCAAGCAGAAGGGCAGAT；

BAALC-R：AGGCTCAGAAGGTCCCAACAA；

BAALC-Probe：FAM-AATTCTACTGAGTCCCTGGCAAGAC-TAMRA。

(2)檢測內參基因ABL的上游引物ABL-F、下游引物ABL-R和探針ABL-Probe，

ABL-F：GATACGAAGGGAGGGTGTACCA；

ABL-R：CTCGGCCAGGGTGTTGAA；

ABL-Probe：FAM-GCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTCCT-TAMRA。

2.一種檢測樣本中BAALC基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)提取樣本中的RNA；

(2)將RNA逆轉錄為cDNA；

(3)加入cDNA到反應管中，利用針對BAALC的上、下游引物和探針檢測樣本中的BAALC基因的熒光信號；利用針對ABL內參基因的上、下游引物和探針檢測樣本中的ABL內參基因的熒光信號；

BAALC-F：AGTCCAAGCAGAAGGGCAGAT；

BAALC-R：AGGCTCAGAAGGTCCCAACAA；

BAALC-Probe：FAM-AATTCTACTGAGTCCCTGGCAAGAC-TAMRA

ABL-F：GATACGAAGGGAGGGTGTACCA；

ABL-R：CTCGGCCAGGGTGTTGAA；

ABL-Probe：FAM-GCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTCCT-TAMRA；

(4)根據BAALC基因的熒光信號和ABL內參基因的熒光信號，確定樣本中的BAALC基因的相對表達量。

3.檢測BAALC基因相對表達量的試劑盒，所述試劑盒包括檢測體系PCR反應液，其特征在于，所述檢測體系PCR反應液包括：

(1)檢測BAALC基因的上游引物BAALC-F、下游引物BAALC-R和探針BAALC-Probe，

BAALC-F：AGTCCAAGCAGAAGGGCAGAT；

BAALC-R：AGGCTCAGAAGGTCCCAACAA；

BAALC-Probe：FAM-AATTCTACTGAGTCCCTGGCAAGAC-TAMRA。

(2)檢測內參基因ABL的上游引物ABL-F、下游引物ABL-R和探針ABL-Probe，

ABL-F：GATACGAAGGGAGGGTGTACCA；

ABL-R：CTCGGCCAGGGTGTTGAA；

ABL-Probe：FAM-GCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTCCT-TAMRA。

4.如權利要求3所述的試劑盒，所述試劑盒還包括陽性對照品、陰性對照品和空白對照品，其特征在于，所述陽性對照品為含有BAALC cDNA序列的陽性質粒溶液，所述陰性對照品為不含有BAALC cDNA序列的質粒溶液，所述空白對照品為生理鹽水或不加任何物質。

5.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括樣本RNA提取試劑，所述樣本RNA提取試劑包括TRIzol、氯仿、異丙醇、75％乙醇和RNase-free水。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述樣本RNA提取試劑還包括紅細胞裂解液，所述紅細胞裂解液包括16μmol/L氯化銨、1mmol/L碳酸氫鉀和12.5μmol/L EDTA。