[發(fā)明專利]一種可變剪接報(bào)告載體及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910008701.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-04
• 公開（公告）號(hào): CN109679976A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉旭;鄭小曼;權(quán)富生;張涌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/63
• 分類號(hào): C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

1.一種可變剪接報(bào)告載體，其特征在于，所述可變剪接報(bào)告載體為在報(bào)告基因表達(dá)載體pEGFP-C1的報(bào)告基因序列內(nèi)插入兩段內(nèi)含子序列intron1和intron2，intron1與intron2分別具有5’剪切位點(diǎn)，分支位點(diǎn)和3’剪切位點(diǎn)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可變剪接報(bào)告載體，其特征在于，所述報(bào)告基因?yàn)镋GFP基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種可變剪接報(bào)告載體，其特征在于，intron1序列如SEQ IDNO:1所示：

GTAAATACAGAAAAAATGTTGAAATAAATAAGACTAGTACTATCTGCCTATGTGTAGAAAATCGCATTACCAACATTGTAAATGTATAAATAATGCACAATCTCAGATTTTTTTTGAATGCTAAGAAAGTCATTTACGTTCATCCACTATCTCAGTAGTAAGCTTAGGAAAATATTTAATAATGAGTTGACTGTGGGAACTAAAGTGTTTTTTTTTCTCTTTAG；

其中，下劃線部分序列依次為5’剪切位點(diǎn)，分支位點(diǎn)和3’剪切位點(diǎn)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種可變剪接報(bào)告載體，其特征在于，intron2序列如SEQ IDNO:2所示：

GTAAGATATTTTTATACAAAGAAAAAAATTAATTTAACTGTAAAATAGTAACAGTCTC TAATGATCTGGCAGAAGACTCAGCTAATTGTCAATTTTTATTTTTCCTTTATAG；

其中，下劃線部分序列依次為5’剪切位點(diǎn)，分支位點(diǎn)和3’剪切位點(diǎn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種可變剪接報(bào)告載體，其特征在于，所述可變剪接報(bào)告載體的序列如SEQ ID NO:3所示。

6.一種可變剪接報(bào)告載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)設(shè)計(jì)并合成序列intron1，將其克隆到載體pEGFP-C1的EGFP序列中，構(gòu)建載體pEGFP-C1-intron1；

2)設(shè)計(jì)并合成序列intron2，將其克隆到載體pEGFP-C1-intron1的EGFP序列中intron1下游，構(gòu)建得到載體pEGFP-C1-ASR。