[發明專利]從原油污染土壤中分離與純化高效石油烴降解菌的方法

有效

• 申請號: 201910003963.X
• 申請日: 2019-01-03
• 公開（公告）號: CN111394250B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 鄭瑾;季遠玲;陳宏坤;王曉玲;杜顯元;陳昌照;于文赫;宋佳宇;張坤峰
• 申請（專利權）人: 中國石油天然氣集團有限公司;中國石油集團安全環保技術研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/00;B09C1/00
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 閆加賀;姚亮

1.一種從原油污染土壤中分離與純化高效石油烴降解菌的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）將無機鹽培養基與高含油土壤樣品混合后進行培養，得到富集后的培養液；

（2）將無機鹽培養基與稀油混合，得到混合液A，再將步驟（1）所得富集后的培養液加入到所述混合液A后進行培養；

步驟（2）中，以所述稀油的總重量為100%計，其飽和烴含量為65%-75%，芳香烴含量為15%-25%，膠質和瀝青質的含量為5%-15%；

（3）將無機鹽培養基與稠油混合，得到混合液B，再將步驟（2）所得培養液加入到所述混合液B后進行培養；

步驟（3）中，以所述稠油的總重量為100%計，其飽和烴含量為30%-40%，芳香烴含量為15%-25%，膠質和瀝青質的含量為30%-45%；

（4）將步驟（3）所得培養液稀釋后涂布于原油無機鹽固體平板培養基上并進行培養；再經純化得到形態一致的純化菌株；

（5）將步驟（4）所得純化菌株于牛肉膏蛋白胨培養基中進行培養，培養后得到菌液；隨后將所述菌液接種至原油無機鹽液體培養基中，以進行原油降解實驗；再測定該純化菌株原油降解率，選擇原油降解率較大的菌株作為所述高效石油烴降解菌純菌株；

以所述無機鹽培養基的體積計，其包含：

硝酸銨：2.0 g/L，磷酸氫二鉀：1.5 g/L，磷酸二氫鉀：3.0 g/L，七水合硫酸鎂：0.1 g/L，無水氯化鈣：0.01 g/L及乙二胺四乙酸二鈉：0.01 g/L；

所述無機鹽培養基的pH值為7.5±0.1。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述高含油土壤樣品為于4^oC冰箱中保存的樣品。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述高含油土壤樣品的含油量為10%-20%。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述無機鹽培養基的體積與高含油土壤樣品的質量的比例為9:1-10:1，單位分別為mL和g。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）-（4）中，所述培養為于25-30^oC，轉速為120-150 rpm下培養7-10天。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，以無機鹽培養基及步驟（1）所得富集后的培養液的總體積計，所述稀油的濃度為1-10 g/L。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，步驟（1）所得富集后的培養液與所述混合液A的體積比為0.1:1。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該方法還包括對步驟（2）所得培養液進行循環馴化培養的操作。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述循環馴化培養為循環馴化培養2-3次。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，以無機鹽培養基及步驟（2）所得培養液的總體積計，所述稠油的濃度為1-10 g/L，且稠油的用量與步驟（2）中稀油的用量相同。

11.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，步驟（2）所得培養液與所述混合液B的體積比為0.1:1。

12.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該方法還包括對步驟（3）所得培養液進行循環馴化培養的操作。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述循環馴化培養為循環馴化培養2-3次。