[發(fā)明專(zhuān)利]逆轉(zhuǎn)錄病毒的生產(chǎn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910003911.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109735507A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范潔;蘇財(cái)忠;童涌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州藥明康德檢測(cè)檢驗(yàn)有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 代理公司: 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 鄭權(quán)

1.一種逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)方法，其特征在于，包括步驟：

(1)采用鼠源細(xì)胞培養(yǎng)病毒，鼠源細(xì)胞的培養(yǎng)基的血清濃度有個(gè)遞減的過(guò)程；

(2)培養(yǎng)早期用較高濃度的血清，待細(xì)胞生長(zhǎng)好后，逐步用含較低濃度血清的培養(yǎng)基更換含較高濃度血清的培養(yǎng)基，至少更換兩次，待血清濃度低至2％時(shí)，每天收獲病毒培養(yǎng)上清；

(3)收獲的培養(yǎng)上清經(jīng)低速離心后收集上清，再采用高速離心獲得病毒沉淀；重懸病毒沉淀，分裝獲得高濃度的病毒。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：步驟(4)病毒培養(yǎng)第一代結(jié)束后，不經(jīng)細(xì)胞凍存復(fù)蘇，將感染了病毒的鼠源細(xì)胞與未經(jīng)病毒感染的細(xì)胞混合，并傳至新的培養(yǎng)瓶中，采用與步驟(1)～(2)相同的培養(yǎng)方法開(kāi)始下一代的病毒生產(chǎn)。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中，所述鼠源細(xì)胞為Mus dunni細(xì)胞。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，培養(yǎng)基更換次數(shù)可以為2次、3次或更多次。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，培養(yǎng)基的血清濃度有個(gè)遞減的過(guò)程，改變培養(yǎng)基中血清的濃度為2次，分別是在病毒培養(yǎng)以及病毒傳代后的第二天、第五天更換。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，每天收獲病毒培養(yǎng)上清之后，補(bǔ)充含低濃度血清的培養(yǎng)基。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中，病毒離心的條件。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述低速離心的轉(zhuǎn)速為1000-3000rpm/min。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述低速離心的時(shí)間為15-25min。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高速離心的轉(zhuǎn)速為的15500-20000rpm/min。

11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高速離心的時(shí)間為2-3小時(shí)。