[發明專利]一種Inb血型抗原芯片及其在紅細胞意外抗體檢測中的應用

在審

• 申請號: 201910003170.8
• 申請日: 2019-01-03
• 公開（公告）號: CN109725145A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 于曉波;汪德清;楊璐
• 申請（專利權）人: 北京蛋白質組研究中心
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

本發明公開了一種血型抗原芯片及其在紅細胞意外抗體檢測中的應用，所述的檢測包括(1)將純化血型抗原包被至載體；(2)使檢測樣品與包被至載體的抗原接觸；(3)加入標記有標記物的二抗；(4)針對標記物進行信號檢測。本發明所述血型抗原芯片和紅細胞意外抗體檢測方法靈敏度高、特異性強、重復性好、不依賴于紅細胞，且能對眾多稀有血型抗原的結合抗體進行高通量檢測，并且可同時實現不同種稀有抗體的精準檢測，無需借助細胞譜核對，避免因人員資質差異導致結果判讀錯誤。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，具體涉及血型抗體的血清學檢測技術，特別是涉及一種血型抗原芯片、其制備方法及在紅細胞意外抗體檢測中的應用。

背景技術

輸血安全已成為醫療衛生工作中的一個重要問題，并引起全社會的高度關注。世界衛生組織(WHO)一貫重視輸血安全工作，近年來進一步加強了血液安全工作的力度，血液安全已被WHO列為了全球衛生工作七項重點工作之一。輸血安全問題包括傳染性輸血不良反應的問題和非傳染性輸血不良反應的問題。英國、美國、法國均啟動了輸血嚴重危害報告系統，用來收集和報告各所醫院自愿報告的與血液成分輸注相關的主要不良事件。從歐美國家統計的數據可以看出，非傳染性輸血不良反應的發生率很高，并且一旦發生，后果極其嚴重。

紅細胞同種意外抗體在中國漢族患者中檢出率為0.38％-2.38％，是引起非傳染性輸血不良反應、新生兒溶血病、血型鑒定困難以及疑難配型、不明原因的貧血、紅細胞輸注無效等的主要原因。輸血前進行紅細胞同種不規則血型抗體精準檢定，對于輸血安全和輸血療效至關重要。為確保輸血安全和輸血療效，紅細胞同種意外抗體檢測已成為輸血前常規檢測項目。若患者體內存在紅細胞意外抗體，一旦輸入的獻血員紅細胞上存在相應抗原，即會發生溶血性輸血不良反應，嚴重者甚至死亡。

由于用來免疫生成單克隆抗體的抗原的精確結構是未知的，來源于多種異體材料包括卵巢囊液及唾液糖蛋白的可溶性抗原和人類細胞，因此為了減少由于抗原變異導致漏檢的風險，這些用于常規血清學檢測的克隆株反應較廣泛，這同樣增加了結構相似的抗原之間的交叉反應風險。有文章報道，ABO單克隆抗體與非ABO抗原的交叉反應盡管在血清學反應中很少出現，但經常出現于非血清學反應如酶免疫分析法和抑制試驗中，因此抗體應用于此類試驗時必須考慮交叉反應的情況。常規血清學試驗檢測靈敏度較低，容易導致獻血員弱抗原的漏檢，輸注至患者體內引起溶血性輸血不良反應，威脅患者生命，應用靈敏度較高的非血清學試驗檢測獻血員血型抗原已成為發展趨勢，若使用特異性不強的稀有血型抗體試劑進行獻血員血型抗原分型可能導致錯誤的分型結果，進而無法確保安全有效的輸血。因此用于獻血員血型抗原檢測的稀有血型抗體試劑的質量評價尤為重要。目前用于稀有血型抗體試劑質量評價的方法是基于凝集反應原理利用已知抗原的試劑紅細胞表征抗體的特異性，但由于紅細胞試劑濃度低、抗原性弱，且不同廠家不同批號之前細胞有差異；同時凝集反應靈敏度低，特異性低，無法實現多重檢測，因此評價稀有血型抗體試劑的質量存在一定弊端。

紅細胞意外抗體檢定一直是輸血安全關注的焦點，為此研發了很多種檢測紅細胞意外抗體的方法，如：經典抗人球蛋白法、柱凝集法、Capture捕獲法等。專利CN00105438.4中通過微柱凝膠法對血小板血型抗原抗體進行檢測，為血小板配型。專利CN200710049305.1提供一種利用微流技術檢測血型的試劑盒、制備方法及檢測方法。然而上述專利中臨床血液中紅細胞意外抗體的檢測普遍存在靈敏度差、動力學線性范圍窄、通量化篩選能力低、假陰性問題嚴重、檢測試劑不便于儲存等技術問題。

專利CN200880019301.1通過將紅細胞或紅細胞膜片段固定到珠子上實現體外鑒定個體的抗紅細胞抗體，然而該專利中所描述的條件參數不可重復，并且該方法應用于紅細胞意外抗體的檢測時，抗原的包被方式、二抗的加入濃度以及樣品的稀釋濃度的變化都會影響檢測的準確性，因此需要對該方法進行重新設計和評估。

發明內容