[發(fā)明專利]一種JMH血型抗原芯片及其在紅細(xì)胞意外抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910003164.2
• 申請(qǐng)日: 2019-01-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109725144A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于曉波;汪德清;楊璐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京蛋白質(zhì)組研究中心
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 北京領(lǐng)科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

本發(fā)明公開(kāi)了一種血型抗原芯片及其在紅細(xì)胞意外抗體檢測(cè)中的應(yīng)用，所述的檢測(cè)包括(1)將純化血型抗原包被至載體；(2)使檢測(cè)樣品與包被至載體的抗原接觸；(3)加入標(biāo)記有標(biāo)記物的二抗；(4)針對(duì)標(biāo)記物進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。本發(fā)明所述血型抗原芯片和紅細(xì)胞意外抗體檢測(cè)方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、不依賴于紅細(xì)胞，且能對(duì)眾多稀有血型抗原的結(jié)合抗體進(jìn)行高通量檢測(cè)，并且可同時(shí)實(shí)現(xiàn)不同種稀有抗體的精準(zhǔn)檢測(cè)，無(wú)需借助細(xì)胞譜核對(duì)，避免因人員資質(zhì)差異導(dǎo)致結(jié)果判讀錯(cuò)誤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及血型抗體的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)，特別是涉及一種血型抗原芯片、其制備方法及在紅細(xì)胞意外抗體檢測(cè)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

輸血安全已成為醫(yī)療衛(wèi)生工作中的一個(gè)重要問(wèn)題，并引起全社會(huì)的高度關(guān)注。世界衛(wèi)生組織(WHO)一貫重視輸血安全工作，近年來(lái)進(jìn)一步加強(qiáng)了血液安全工作的力度，血液安全已被WHO列為了全球衛(wèi)生工作七項(xiàng)重點(diǎn)工作之一。輸血安全問(wèn)題包括傳染性輸血不良反應(yīng)的問(wèn)題和非傳染性輸血不良反應(yīng)的問(wèn)題。英國(guó)、美國(guó)、法國(guó)均啟動(dòng)了輸血嚴(yán)重危害報(bào)告系統(tǒng)，用來(lái)收集和報(bào)告各所醫(yī)院自愿報(bào)告的與血液成分輸注相關(guān)的主要不良事件。從歐美國(guó)家統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)可以看出，非傳染性輸血不良反應(yīng)的發(fā)生率很高，并且一旦發(fā)生，后果極其嚴(yán)重。

紅細(xì)胞同種意外抗體在中國(guó)漢族患者中檢出率為0.38％-2.38％，是引起非傳染性輸血不良反應(yīng)、新生兒溶血病、血型鑒定困難以及疑難配型、不明原因的貧血、紅細(xì)胞輸注無(wú)效等的主要原因。輸血前進(jìn)行紅細(xì)胞同種不規(guī)則血型抗體精準(zhǔn)檢定，對(duì)于輸血安全和輸血療效至關(guān)重要。為確保輸血安全和輸血療效，紅細(xì)胞同種意外抗體檢測(cè)已成為輸血前常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。若患者體內(nèi)存在紅細(xì)胞意外抗體，一旦輸入的獻(xiàn)血員紅細(xì)胞上存在相應(yīng)抗原，即會(huì)發(fā)生溶血性輸血不良反應(yīng)，嚴(yán)重者甚至死亡。

由于用來(lái)免疫生成單克隆抗體的抗原的精確結(jié)構(gòu)是未知的，來(lái)源于多種異體材料包括卵巢囊液及唾液糖蛋白的可溶性抗原和人類細(xì)胞，因此為了減少由于抗原變異導(dǎo)致漏檢的風(fēng)險(xiǎn)，這些用于常規(guī)血清學(xué)檢測(cè)的克隆株反應(yīng)較廣泛，這同樣增加了結(jié)構(gòu)相似的抗原之間的交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。有文章報(bào)道，ABO單克隆抗體與非ABO抗原的交叉反應(yīng)盡管在血清學(xué)反應(yīng)中很少出現(xiàn)，但經(jīng)常出現(xiàn)于非血清學(xué)反應(yīng)如酶免疫分析法和抑制試驗(yàn)中，因此抗體應(yīng)用于此類試驗(yàn)時(shí)必須考慮交叉反應(yīng)的情況。常規(guī)血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)靈敏度較低，容易導(dǎo)致獻(xiàn)血員弱抗原的漏檢，輸注至患者體內(nèi)引起溶血性輸血不良反應(yīng)，威脅患者生命，應(yīng)用靈敏度較高的非血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)獻(xiàn)血員血型抗原已成為發(fā)展趨勢(shì)，若使用特異性不強(qiáng)的稀有血型抗體試劑進(jìn)行獻(xiàn)血員血型抗原分型可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的分型結(jié)果，進(jìn)而無(wú)法確保安全有效的輸血。因此用于獻(xiàn)血員血型抗原檢測(cè)的稀有血型抗體試劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)尤為重要。目前用于稀有血型抗體試劑質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法是基于凝集反應(yīng)原理利用已知抗原的試劑紅細(xì)胞表征抗體的特異性，但由于紅細(xì)胞試劑濃度低、抗原性弱，且不同廠家不同批號(hào)之前細(xì)胞有差異；同時(shí)凝集反應(yīng)靈敏度低，特異性低，無(wú)法實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)，因此評(píng)價(jià)稀有血型抗體試劑的質(zhì)量存在一定弊端。

紅細(xì)胞意外抗體檢定一直是輸血安全關(guān)注的焦點(diǎn)，為此研發(fā)了很多種檢測(cè)紅細(xì)胞意外抗體的方法，如：經(jīng)典抗人球蛋白法、柱凝集法、Capture捕獲法等。專利CN00105438.4中通過(guò)微柱凝膠法對(duì)血小板血型抗原抗體進(jìn)行檢測(cè)，為血小板配型。專利CN200710049305.1提供一種利用微流技術(shù)檢測(cè)血型的試劑盒、制備方法及檢測(cè)方法。然而上述專利中臨床血液中紅細(xì)胞意外抗體的檢測(cè)普遍存在靈敏度差、動(dòng)力學(xué)線性范圍窄、通量化篩選能力低、假陰性問(wèn)題嚴(yán)重、檢測(cè)試劑不便于儲(chǔ)存等技術(shù)問(wèn)題。

專利CN200880019301.1通過(guò)將紅細(xì)胞或紅細(xì)胞膜片段固定到珠子上實(shí)現(xiàn)體外鑒定個(gè)體的抗紅細(xì)胞抗體，然而該專利中所描述的條件參數(shù)不可重復(fù)，并且該方法應(yīng)用于紅細(xì)胞意外抗體的檢測(cè)時(shí)，抗原的包被方式、二抗的加入濃度以及樣品的稀釋濃度的變化都會(huì)影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性，因此需要對(duì)該方法進(jìn)行重新設(shè)計(jì)和評(píng)估。

發(fā)明內(nèi)容