[發明專利]具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽及其活性優化修飾物

在審

• 申請號: 201910001729.3
• 申請日: 2019-01-02
• 公開（公告）號: CN109678934A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 吳志宏
• 申請（專利權）人: 浙江亮肽生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K7/08;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/36
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 姚宇吉

1.具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽，其特征在于，抗菌肽是具有選擇性抑制銅綠假單胞菌活性的人源天然蛋白，所述抗菌肽的氨基酸序列由12-22個氨基酸殘基組成，其氨基酸序列為：SEQ ID NO.1；

SEQ ID NO.1:GRHGSGLGHSSSHGQHGSGSGR。

2.根據權利要求1所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽，其特征在于，所述抗菌肽從人體足跟角質層腳屑中提取、分離、純化得到。

3.根據權利要求2所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽，其特征在于，所述提取的過程為：

收集人體足跟角質層腳屑，采用酸性乙酰乙酸緩沖液提取總蛋白；

所述分離、純化的過程為：

提取的總蛋白經超濾管以三羥甲基氨基甲烷檸檬酸鹽緩沖液膜滲濾后,用肝素瓊脂糖凝膠柱進行親和層析；

附著肝素的蛋白先通過含氯化鈉的三羥甲基氨基甲烷檸檬酸鹽緩沖液洗脫，再用三氟乙酸進行膜滲濾；

滲出液通過制備柱以反向高效液相色譜方式進行分離純化,富集的蛋白經冷凍干燥后溶解于乙酸水溶液中保存；

富集的蛋白通過制備柱以反向高效液相色譜方式進行再一次分離純化,分別收集各個峰值區的蛋白并用質譜儀進行分子量鑒定和氮末端蛋白測序。

4.根據權利要求1所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽，其特征在于，抗菌肽SEQ NO.1對銅綠假單胞菌的最小殺菌濃度MBC90達到0.038μg/ml。

5.根據權利要求1所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽，其特征在于，抗菌肽SEQ NO.1對銅綠假單胞菌的殺菌效果依賴于酸性環境。

6.具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽的活性優化修飾物，其特征在于，根據選擇性抑制銅綠假單胞菌活性的滅菌肽SEQ ID NO.1多肽合成得到；包括：氨基酸序列：SEQID NO.2-6；

SEQ ID NO.1:GRHGSGLGHSSSHGQHGSGSGR，

SEQ ID NO.2:GHHGGGGGHGGGHGGHGGGGGH，

SEQ ID NO.3:RGSGSGHQGHSSSHGLGSGHRG，

SEQ ID NO.4：SLSSGHGSGHGHQRGGHRSGSG，

SEQ ID NO.5：GRHGSGLGHSSSHGQH，

SEQ ID NO.6：HAHSGHGQSTQR。

7.根據權利要求6所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽的活性優化修飾物，其特征在于，SEQ NO.2、SEQ NO.3和SEQ NO.4的殺菌效果相比SEQ ID NO.1的殺菌效果強，最小殺菌濃度MBC90都小于0.019μg/mL。

8.根據權利要求6所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽的活性優化修飾物，其特征在于，SEQ NO.5的最小殺菌濃度MBC90達到0.3μg/mL。

9.根據權利要求6所述的具有選擇性抗銅綠假單胞菌活性的滅菌肽的活性優化修飾物，其特征在于，SEQ NO.6的最小殺菌濃度MBC90達到0.15μg/mL。