[發明專利]用于病毒載體分離的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201880083999.7
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN111566219A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: T.史密斯
• 申請（專利權）人: 環球生命科技咨詢美國有限責任公司
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;C12N7/00;C12M3/00;C12M1/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;梅黎

本發明涉及用于純化病毒載體的方法，更具體地，它涉及通過使用單一自動化過程，從生產者細胞中純化病毒載體。該方法包括下述步驟：a）將生產者細胞和細胞裂解緩沖液加入處理容器中；b）在所述處理容器中混合所述生產者細胞和細胞裂解緩沖液，以獲得混合物；c）使所述混合物流過用于純化病毒載體的色譜柱，其中所述病毒載體被吸附到所述色譜柱上；和d）將病毒載體從色譜柱中洗脫到產物容器內。

發明領域

本發明涉及病毒載體的純化，更具體地，它涉及通過使用單一自動化過程，從生產者細胞中純化病毒載體的方法和試劑盒。

發明背景

細胞療法是用于治療嚴重疾病例如癌癥的新興領域，并且代表對傳統療法的補充。幾十年來，癌癥治療一直局限于化學療法和放射療法。最近以來，生物藥物如伊馬替尼（Gleevec?）和曲妥珠單抗（Herceptin?）已越來越普遍。這些藥物通過歸巢于主要在癌細胞中見到的特異性分子改變而靶向那些細胞。

但是在過去的幾年中，已出現了新的療法形式，細胞療法或免疫療法，作為用于例如癌癥治療的選項。

快速崛起的免疫療法稱為過繼性細胞轉移（ACT）：收集并使用患者自身的免疫細胞來治療其癌癥。存在幾種類型的ACT（TIL、TCR和CAR），但最接近于產生被美國食品和藥物管理局（Food and Drug Administration）（FDA）批準的治療的ACT稱為CAR T細胞療法。

直到最近，CAR T細胞療法的使用仍局限于很大程度上在患有晚期血液癌的患者中的小型臨床試驗。但是，由于這些療法在一些患者（兒童和成人兩者，所有其它療法對于其已停止工作）中已產生的顯著應答，這些療法同樣仍獲得了研究人員和公眾的關注。

一種CAR T細胞療法在2017年8月被批準用于治療患有急性成淋巴細胞性白血病（ALL）的兒童。并且用于患有晚期淋巴瘤的成人的第二種在2017年10月獲得批準。

CAR T細胞療法依靠T細胞，所述T細胞在協調免疫應答和殺死被病原體感染的細胞方面具有關鍵作用。該療法要求從患者中抽血并且分離出T細胞。接下來，使用病毒載體，對T細胞進行遺傳改造，以在其表面上產生稱為嵌合抗原受體或CAR的受體。

當前，用于細胞轉化的病毒載體的純化并非自動化過程。

病毒載體的純化通常需要柱以可靠地分離顆粒。例如，慢病毒純化需要對其蛋白質外殼具有特異性的抗體。與細胞分離的情況一樣，每個類型的病毒株都需要抗體特異性的純化方法。然而，也可以通過使用密度梯度的離心步驟或類似的基于溶液的技術，來完成病毒顆粒與細胞和細胞碎片的分開。

與其它許多生物過程一樣，這個步驟中的污染物可能在最好的情況下延遲對患者的治療，并且在最壞的情況下負面影響其健康。值得信賴的“一勞永逸”方法的產生將確保下游過程的安全與有效。

能夠將生成純化的病毒載體的過程自動化將是高度期望的，所述病毒載體用于將T細胞轉化成CAR T細胞。這在當前的細胞療法市場中尤其相關，因為慢病毒載體是用于將基因插入T細胞內用于CAR表達的最常用策略。

迄今為止，不存在此類可用的所需純化方法，其廣泛適用于能夠轉化細胞的多種病毒株。

因此，仍然需要用于病毒載體純化的廣泛適用的方法。

發明概述

本發明通過提供廣泛適用的方法和試劑盒來避免現有技術內的缺點，所述方法和試劑盒用于在自動化過程中的病毒載體純化，優選使用已經預期包括在細胞療法工作流中的儀器，例如Xuri Cell Harvester?。

使用基于溶液的細胞裂解、病毒顆粒的柱提取、洗滌和洗脫步驟的組合，該方法可用于在多合一試劑盒產品中純化任何類型的病毒載體，其提供了與現有技術相比的幾個優點。本發明的方法和試劑盒提供了封閉的無菌系統，用于在自動化過程中的病毒載體純化。