[發(fā)明專利]用于病毒載體分離的方法和試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880083999.7
• 申請(qǐng)日: 2018-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN111566219A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: T.史密斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 環(huán)球生命科技咨詢美國有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N15/86
• 分類號(hào): C12N15/86;C12N7/00;C12M3/00;C12M1/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;梅黎

1.一種在生產(chǎn)者細(xì)胞中通過培養(yǎng)生產(chǎn)包含目的基因的病毒載體之后分離所述病毒載體的方法，其包括在連續(xù)工作流中的下述步驟：a）將生產(chǎn)者細(xì)胞（1）和細(xì)胞裂解緩沖液（2）加入處理容器（5）中；b）在所述處理容器（5）中混合所述生產(chǎn)者細(xì)胞和細(xì)胞裂解緩沖液，以形成混合物；c）使來自處理容器（5）的所述混合物流過包含用于純化病毒載體的親和樹脂的色譜柱（8），其中所述病毒載體被吸附到所述色譜柱（8）中的所述樹脂上；和d）將病毒載體從色譜柱（8）中的樹脂洗脫到產(chǎn)物容器（7）內(nèi)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在步驟d）中在產(chǎn)物容器（7）中獲得的病毒載體用于轉(zhuǎn)染新鮮的生產(chǎn)者細(xì)胞，所述生產(chǎn)者細(xì)胞在轉(zhuǎn)染之后進(jìn)行培養(yǎng)，然后重復(fù)步驟a）-d）至少一次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中從所述方法獲得的病毒載體的數(shù)目由色譜柱（8）中樹脂的體積和飽和點(diǎn)決定。

4.根據(jù)上述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其包括在步驟c）或d）之后的下述步驟：將洗滌緩沖液（3）釋放到處理容器（5）內(nèi)，以沖洗出細(xì)胞/碎片，并且將其噴射到廢物容器（6）內(nèi)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述處理容器（5）、產(chǎn)物容器（7）和柱（8）安裝在盒中，并且其中所述細(xì)胞裂解緩沖液（2）、洗滌緩沖液（3）、洗脫緩沖液（4）和任選地廢物容器（6）位于所述盒的外部。

6.根據(jù)上述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其中所述色譜柱（8）在所述盒中是可互換的，并且包含對(duì)于所選病毒載體特異性的親和樹脂。

7.根據(jù)上述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其中所述處理容器（5）提供有由過濾器完成的出口，以將任何完整的細(xì)胞/細(xì)胞碎片保留在處理容器（5）內(nèi)。

8.根據(jù)上述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其中所述病毒載體是慢病毒或γ逆轉(zhuǎn)錄病毒。

9.根據(jù)上述權(quán)利要求中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其中所述目的基因包含疾病調(diào)節(jié)基因，例如編碼嵌合抗原（CAR）的基因。

10.根據(jù)上述權(quán)利要求2-9中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其中在重復(fù)步驟a）-d）之前，在涉及SPR（表面等離振子共振）檢測的質(zhì)量測定中，測試產(chǎn)物容器（7）中分離的病毒載體的純度。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中一項(xiàng)或多項(xiàng)分離的病毒載體用于細(xì)胞療法的用途。

12. 根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中所述病毒載體用于將T細(xì)胞轉(zhuǎn)化成CAR T細(xì)胞。

13.一種試劑盒，其包括安裝在一個(gè)相同盒中的處理容器（5）、產(chǎn)物容器（7）和親和柱（8），并且進(jìn)一步包括位于所述盒外部的用于生產(chǎn)者細(xì)胞的來源容器（1）、細(xì)胞裂解緩沖液（2）、洗滌緩沖液（3）、洗脫緩沖液（4）和任選地廢物容器（6）。