[發(fā)明專利]MHC多聚體的生產方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201880081619.6
• 申請日: 2018-10-26
• 公開（公告）號: CN111936511A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設計）人: 雅克·雅各布斯·內夫斯;赫伊伯·奧瓦;馬烏戈熱塔·安娜·加斯特卡;喬蓮·約翰娜·盧伊馬斯特羅
• 申請（專利權）人: 萊頓大學醫(yī)學中心附屬萊頓教學醫(yī)院
• 主分類號: C07K14/74
• 分類號: C07K14/74;G01N33/50;G01N33/569
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 崔巍;張瑩

1.用于生產MHC分子的方法，所述方法包括：

a.在降低的溫度下提供MHC分子，所述MHC分子在所述MHC分子的肽結合槽中結合有模板肽，所述模板肽在升高的溫度下與所述MHC分子解離，其中所述MHC分子優(yōu)選是人白細胞抗原-A(HLA-A)分子；

b.將所述溫度改變至升高的溫度，由此使所述模板肽與所述MHC分子解離；和

c.在允許所需肽結合至所述MHC分子的肽結合槽的條件下，使所述MHC分子在所述升高的溫度下與所述所需肽接觸以結合至所述MHC分子的肽結合槽。

2.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述降低的溫度是10℃或更低的溫度和/或所述升高的溫度是15℃或更高的溫度，優(yōu)選地，其中所述降低的溫度是4℃或更低的溫度，和/或其中所述升高的溫度在20℃至40℃之間并且包括20℃和40℃。

3.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，b)和c)同時進行。

4.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所需肽以超過結合有模板肽的所述MHC分子的量的過量提供，優(yōu)選其中所述過量是至少約5倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、200倍的摩爾過量。

5.前述權利要求中任一項所述的方法，其中步驟a)中的所述MHC分子作為單體、作為包含至少兩個MHC分子的復合物或作為多聚體提供。

6.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述MHC分子是包含所述MHC分子和至少一個其他分子，優(yōu)選至少一個其他蛋白質，優(yōu)選至少一個其他MHC分子的復合物的一部分。

7.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述MHC分子是人HLA-A分子，并且其中所述HLA-A分子優(yōu)選選自HLA-A*02和HLA-A*02：01。

8.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述模板肽通過取代至少一個、兩個或更多個錨定殘基，優(yōu)選一個或兩個錨定殘基而獲得。

9.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述模板肽是包含以下的多肽：

a.如SEQ ID NO：1(IAKEPVHGV)、SEQ ID NO：2(IAKEPVHGA)或SEQ ID NO：3(FAPGNAPAL)中所示的多肽序列；或者

b.具有1、2、3或4個氨基酸取代、缺失或插入的如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ IDNO：3中所示的多肽序列。

10.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述方法針對結合至所述MHC分子的肽結合槽的不同所需肽并行地執(zhí)行。

11.前述權利要求中任一項所述的方法，其中步驟a)中提供的所述MHC分子在所述降低的溫度下產生并負載所述模板肽。

12.前述權利要求中任一項所述的方法，其中在所述MHC分子的肽結合槽中結合有模板肽的MHC分子是通過在10度或更低的溫度下在所述模板肽存在下將MHC分子重折疊而提供的。

13.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述方法是無細胞的。

14.前述權利要求中任一項所述的方法，其進一步包括檢測所述所需肽與所述MHC分子的結合，優(yōu)選其中所述結合是通過檢測與所述所需肽締合的標記物來檢測的，優(yōu)選其中所述所需肽包含所述標記物。

15.前述權利要求中任一項所述的方法，用于在測試或參考化合物的存在下確定所述所需肽的結合。

16.可通過前述權利要求中任一項所述的方法獲得的MHC分子。