[發明專利]用于改善抗VEGF抗體的VEGF受體阻斷選擇性的方法

在審

• 申請號: 201880081350.1
• 申請日: 2018-12-21
• 公開（公告）號: CN111479588A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 約爾格·本茨;斯特凡·登格爾;塞巴斯蒂安·芬恩;約爾格·默勒肯;安德烈亞斯·埃勒
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/22
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩;程金山

本發明涉及用于改善抗VEGF抗體以提供或改善優先抑制VEGF與VEGF?R2結合而不是VEGF與VEGF?R1結合的抗體的方法，以及通過所述方法提供的抗體。

發明領域

本發明涉及用于改善抗VEGF抗體以提供或改善優先抑制VEGF與VEGF-R2結合而不是VEGF與VEGF-R1結合的抗體的方法，以及通過所述方法提供的抗體。

背景技術

被批準用于臨床應用的抗VEGF抗體，例如和抑制VEGF結合兩種受體，VEGF-R1(FLT-1，fms樣酪氨酸激酶)和VEGF-R2(KDR/FLK-1，胎肝激酶)。VEGF-R1和VEGF-R2是密切相關的受體酪氨酸激酶(RTK)。盡管假設VEGF-R2主要負責VEGF介導的血管發生(Holash，J.等人，Proc Natl Acad Sci U S A.2002Aug 20；99(17)：11393-8)，已知VEGF-R1具有與血管發生無關的其它重要的生物學作用，例如在破骨細胞分化中(Aldridge，S.E.等人，Biochem Biophys Res Commun.2005Sep30；335(3)：793-8)。

已經報道了一些抗VEGF抗體，其優先抑制VEGF與VEGF-R2的結合，但不顯著抑制VEGF與VEGF-R1的結合，但在臨床上尚未成功(WO200064946描述了稱為“2C3”的抗體，WO2009060198描述了稱為“r84”的抗體，和WO2012089176描述了稱為“L3H6”的抗體，EP3006465描述了稱為“HF2-1”、“HF2-5”、“HF2-9”和“HF2-11”的抗體)。通過阻斷VEGF與VEGF-R2的結合，而不是與VEGF-R1的結合，描述了所述抗體具有改善的安全性特征，并且不顯示與抗VEGF治療相關的常見毒性相關副作用(Brekken，R.A.等人，Cancer Res.2000年9月15日；60(18)：5117-24；Sullivan，L.A.等人，PLoS One，2010年8月6日；5(8)：e12031)。

需要用于改善抗VEGF抗體，尤其是VEGFR阻斷選擇性的方法，以提供有希望的臨床抗體候選物。

發明概述

本發明涉及改善結合VEGF的抗體的VEGFR阻斷選擇性的方法，所述抗體包含由VH和VL結構域的同源對形成的抗原結合位點，其中所述抗體結合VEGF的表位，所述表位與VEGF分子中的VEGF-R1結合區和VEGF-R2結合區重疊。本發明的方法包括(a)提供對由所述結合VEGF的抗體的第一和第二抗原結合位點結合的VEGF二聚體的復合物(VEG-二聚體-抗體復合物)的三級結構的分析，(b)鑒定位于所述抗體的VH結構域或VL結構域中的至少一個氨基酸殘基，其中所述第一抗原結合位點內的所述氨基酸殘基和所述第二抗原結合位點內的所述氨基酸殘基在VEGF二聚體-抗原復合物中以緊密接近的空間排列；和(c)用具有更大側鏈體積的氨基酸置換步驟b)中鑒定的所述至少一個氨基酸殘基。

使用本發明的方法，某些抗VEGF抗體的VEGFR阻斷選擇性可以通過在它們的氨基酸序列中，特別是在不涉及抗原結合的區域中，的一些修飾而改善。這樣的抗體可表現出改善的安全性特征，例如通過避免或減少由通過VEGF-R1阻斷VEGF-信號傳導引起的副作用。

在一個實施方案中，抗體結合VEGF-A121二聚體上的構象表位，其中VEGF-A121包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，其中所述表位在VEGF二聚體內的單獨VEGF-A121分子之一中包含氨基酸F17、M18、D19、Y21、Q22、R23、Y25、H27、P28、I29、E30、M55、N62、L66、N100、K101、C102、E103、C104、R105和P106；和在VEGF二聚體內的另一個單獨VEGF-A121分子中包含氨基酸E30、K48、M81和Q87。在一個實施方案中，表位是通過X射線晶體學測量的。

在一個實施方案中，具有更大側鏈體積的氨基酸是芳香族氨基酸。