[發明專利]用于改善抗VEGF抗體的VEGF受體阻斷選擇性的方法

在審

• 申請號: 201880081350.1
• 申請日: 2018-12-21
• 公開（公告）號: CN111479588A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 約爾格·本茨;斯特凡·登格爾;塞巴斯蒂安·芬恩;約爾格·默勒肯;安德烈亞斯·埃勒
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/22
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩;程金山

1.改善結合VEGF的抗體的VEGFR阻斷選擇性的方法，所述抗體包含由VH和VL結構域的同源對形成的抗原結合位點，其中所述抗體結合VEGF的表位，所述表位與VEGF分子中的VEGF-R1結合區和VEGF-R2結合區重疊，所述方法包括以下步驟

a)提供由所述結合VEGF的抗體的第一和第二抗原結合位點結合的VEGF二聚體的復合物(VEGF-二聚體-抗體復合物)的三級結構的分析；

b)鑒定位于所述抗體的VH結構域或VL結構域中的至少一個氨基酸殘基，其中所述第一抗原結合位點內的所述氨基酸殘基和所述第二抗原結合位點內的所述氨基酸殘基在VEGF-二聚體-抗原復合物中以緊密接近的空間排列；和

c)用具有更大側鏈體積的氨基酸置換步驟b)中鑒定的所述至少一個氨基酸殘基。

2.權利要求1所述的方法，其中所述抗體與由SEQ ID NO：01的VH和SEQ ID NO：02的VL表征的抗體結合相同或重疊的表位。

3.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述抗體結合VEGF-A121的二聚體上的構象表位，其中VEGF-A121包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，其中所述表位包含

-在VEGF二聚體內的單獨VEGF-A121分子之一中的氨基酸F17、M18、D19、Y21、Q22、R23、Y25、H27、P28、I29、E30、M55、N62、L66、N100、K101、C102、E103、C104、R105和P106；以及

-在VEGF二聚體內的另一個單獨VEGF-A121分子中的氨基酸E30、K48、M81和Q87。

4.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，具有更大側鏈體積的氨基酸是芳香族氨基酸。

5.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，至少一個被置換的氨基酸殘基位于所述抗體的重鏈可變結構域中。

6.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，至少一個被置換的氨基酸殘基位于所述抗體的重鏈CDR內。

7.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，至少一個被置換的氨基酸殘基位于所述抗體的H-CDR2內。

8.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，至少一個被替換的氨基酸殘基位于所述抗體的重鏈FR內。

9.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，至少一個被替換的氨基酸殘基位于所述抗體的H-FR3內。

10.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述抗體包含：(a)CDR-H1，其包含SEQID NO：03的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO：04的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO：05的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO：06的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO：07的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO：08的氨基酸序列。

11.前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述抗體包含VH和VL，所述VH包含SEQID NO：01，所述VL包含SEQ ID NO：02。

12.前述權利要求中任一項所述的方法提供的結合VEGF的抗體。

13.前述權利要求中任一項所述的方法提供的結合VEGF的抗體，其中所述抗體與VEGF的結合顯著抑制VEGF與VEGF受體VEGF-R2的結合，而不顯著抑制VEGF與VEGF受體VEGF-R1的結合。

14.分離的核酸，其編碼權利要求1至13所述的方法提供的抗體。

15.宿主細胞，其包含權利要求14的核酸。