[發明專利]重組多肽中的工程化O-糖基化及其用途

在審

• 申請號: 201880081343.1
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN111479820A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: A.蒂布爾斯;M.帕沃思;D.希加奇;E.羅西;K.A.科扎科夫斯卡;T.V.默里
• 申請（專利權）人: 免疫醫療有限公司
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107;C07K9/00;C12P21/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 張宇騰;彭昶

1.一種用于產生O-糖基化重組治療性蛋白的方法，該方法包括：

a.在細胞培養基的存在下在宿主細胞中表達工程化治療性蛋白，其中

i.該工程化治療性蛋白包含至少一個工程化的O-連接的糖基化序列，并且

ii該細胞培養基包含用于O-糖基化的試劑，

使得在該重組治療性蛋白中該至少一個O-連接的糖基化序列與O-聚糖共價結合；以及

b.任選地純化該重組治療性蛋白。

2.根據權利要求1所述的方法，該方法進一步包括

a.獲得包含DNA的表達載體，該DNA編碼該包含該至少一個工程化的O-連接的糖基化序列的工程化治療性蛋白；以及

b.用該表達載體轉染宿主細胞。

3.根據權利要求1或2中任一項所述的方法，其中該細胞培養基包含含疊氮化物的化合物，使得該O-聚糖經疊氮化物標記。

4.根據權利要求4所述的方法，其中該含疊氮化物的化合物是GalNAz。

5.一種O-糖基化重組治療性蛋白，該O-糖基化重組治療性蛋白根據如權利要求1至4中任一項所述的方法產生。

6.一種O-糖基化重組治療性蛋白，該O-糖基化重組治療性蛋白包含與至少一個O-聚糖共價結合的至少一個工程化的O-連接的糖基化序列，其中該重組治療性蛋白進一步包含天然糖基化模式。

7.根據權利要求6所述的O-糖基化重組治療性蛋白，其中該O-聚糖經疊氮化物官能團標記。

8.一種多肽，該多肽包含O-連接的糖基化序列，其中該O-連接的糖基化序列包含選自表1所列的那些序列的序列。

9.一種O-糖基化多肽，該O-糖基化多肽包含O-連接的糖基化序列，其中該O-連接的糖基化序列包含選自表1所列的那些序列的序列，并且其中該O-連接的糖基化序列與O-聚糖共價結合。

10.包含用于O-糖基化的試劑的細胞培養基用于由表達工程化治療性蛋白的宿主細胞產生O-糖基化重組治療性蛋白的用途，其中

a.該工程化治療性蛋白包含至少一個工程化的O-連接的糖基化序列；并且

b.該重組治療性蛋白包含與至少一個O-聚糖共價結合的該至少一個工程化的O-連接的糖基化序列。

11.一種藥物組合物，該藥物組合物包含根據權利要求5至7中任一項所述的O-糖基化重組治療性蛋白或根據權利要求8或權利要求9所述的多肽和藥學上可接受的賦形劑。

12.根據權利要求5至7中任一項所述的O-糖基化重組治療性蛋白或根據權利要求8或9所述的多肽，用作藥物。

13.一種治療或預防患者的疾病的方法，該方法包括向該患者施用根據權利要求5至7中任一項所述的O-糖基化重組治療性蛋白或根據權利要求8或9所述的多肽。

14.一種用于產生O-糖基化重組治療性蛋白綴合物的方法，該方法包括：

a.提供根據權利要求5至7中任一項所述的O-糖基化重組治療性蛋白或根據權利要求8或9所述的多肽；以及

b.使該O-聚糖與期望附接至該重組治療性蛋白的分子的活性基團反應，以使該分子與該O-聚糖共價連接。

15.根據權利要求14所述的方法，其中該反應包括疊氮化物-炔偶聯反應。

16.一種O-糖基化重組治療性蛋白綴合物，該O-糖基化重組治療性蛋白綴合物根據如權利要求14或15中任一項所述的方法產生。