[發明專利]具有光致發光的非常規和/或反向變化的數字擴增試驗

在審

• 申請號: 201880078902.3
• 申請日: 2018-10-12
• 公開（公告）號: CN111433372A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: E·A·赫夫納;D·瑪爾
• 申請（專利權）人: 生物輻射實驗室股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6818
• 分類號: C12Q1/6818
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 張靜;陳揚揚

1.一種分析方法，所述方法包括：

形成獨立樣份，每個樣份包括相同樣品的一部分，其中每個樣份還包括(i)具有標記物的探針，(ii)具有猝滅劑并配置為與探針雜交以猝滅標記物的接收物，以及(iii)分隔物，所述分隔物被配置成與探針和/或接收物雜交以阻斷接收物與探針的雜交，并且其中僅一個子集的樣份包含來自樣品的靶標的至少一個拷貝；

在所述樣份中進行擴增反應以產生對應于靶標的擴增子，其中所述分隔物與擴增子雜交，并且其中所述分隔物通過擴增反應在靶標陽性樣份中延伸或降解；以及

檢測來自所述樣份的標記物的光致發光，其中靶標陽性樣份的光致發光小于靶標陰性樣份的光致發光。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述分隔物與接收物雜交以阻斷接收物與探針的雜交。

3.如權利要求1所述的方法，其中，所述分隔物與探針雜交以阻斷接收物與探針的雜交。

4.如權利要求1所述的方法，其中，與探針和/或接收物雜交的分隔物比與探針雜交的接收物具有更多的堿基對。

5.如權利要求1所述的方法，其中，所述分隔物與擴增子形成比與探針和/或接收物更多的堿基對。

6.如權利要求1所述的方法，其中，與擴增子雜交的分隔物比與探針和/或接收物雜交的分隔物具有更高的解鏈溫度。

7.如權利要求1所述的方法，其中，所述探針和所述接收物不彼此共價連接。

8.如權利要求1所述的方法，其中，所述探針和所述接收物在相同分子中提供。

9.如權利要求8所述的方法，其中，所述分隔物被配置為阻斷接收物與探針的分子內雜交。

10.如權利要求9所述的方法，其中，所述分隔物與探針序列、接收物序列和/或與探針序列和接收物序列之間的間隔序列雜交。

11.如權利要求1所述的方法，其中，所述探針和/或所述接收物被配置為在進行擴增反應的步驟期間防止探針和/或接收物的3'延伸。

12.如權利要求11所述的方法，其中，所述探針和所述接收物中的至少一個包括3'-末端磷酸。

13.如權利要求1所述的方法，其中，所述分隔物在進行擴增反應的步驟中作為擴增引物延伸。

14.如權利要求1所述的方法，其中，所述分隔物通過擴增反應水解。

15.如權利要求14所述的方法，其中，所述分隔物被配置成在進行擴增反應的步驟期間防止所述分隔物的3'-延伸。

16.如權利要求1所述的方法，其中，所述分隔物具有不與靶標雜交的5'尾和與靶標雜交的3'序列，并且其中所述探針或所述接收物與所述分隔物的5'尾雜交但不與3'序列雜交。

17.如權利要求1所述的方法，其中，所述形成步驟包括以下步驟：形成每個樣份作為相同混合物的等分試樣。

18.如權利要求1所述的方法，其中，每個樣份是液滴，并且形成步驟包括產生液滴的步驟。

19.如權利要求1所述的方法，其中，進行擴增反應的步驟包括使樣份熱循環以促進聚合酶鏈式反應的步驟。

20.如權利要求1所述的方法，進一步包括用激發光照射樣份以引起光致發光的步驟。