[發明專利]檢測急性博爾納病病毒(BDV)感染的方法及其診斷試劑盒，特別是組合區分急性及慢性和潛伏性BDV感染的方法及其診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201880072287.5
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN111316100A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: H·路德維希;L·博德
• 申請（專利權）人: H·路德維希;L·博德
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王健;林曉紅

本發明一個方面涉及檢測急性博爾納病病毒(BDV)感染的方法。根據本發明，樣品中p24 BDV磷蛋白和p40 BDV核蛋白的異二聚體的存在使用夾心ELISA通過這兩種蛋白的抗體確定。本發明還涉及用于檢測急性BDV感染的夾心ELISA的診斷試劑盒。所述試劑盒使用p24 BDV磷蛋白的一抗和p40 BDV核蛋白的第二一抗，至少一種報道分子標記的二抗，將一抗固定在表面的手段，以及進行根據本發明的方法的說明書。本發明還涉及根據本發明的方法和新診斷試劑盒與已知檢測循環免疫復合物(CIC)的方法和抗體的組合。因此區分急性BDV感染與慢性和潛伏性BDV感染(人和動物)，例如允許對于患病個體的鑒別診斷和治療監測以及根據健康攜帶者的感染狀態鑒定健康風險。

發明領域

第一方面，本發明涉及一種用于檢測急性博爾納病病毒(Borna disease virus，BDV)感染的方法。根據本發明，這包括通過夾心ELISA確定樣品中由p24 BDV磷蛋白和p40BDV核蛋白組成的異二聚體的存在。這種確定包括使用針對p24 BDV磷蛋白和針對p40BDV核蛋白的特異性一抗。

第二方面，本發明提供了用于檢測急性BDV感染的夾心ELISA的診斷試劑盒。所述診斷試劑盒包含第一一抗和第二一抗，其中這些一抗之一針對p24 BDV磷蛋白，而另一個一抗針對p40 BDV核蛋白，以及包含用報道分子標記的至少一個二抗，將一抗固定在表面上的手段以及實施本發明方法的說明書。

第三方面，本發明涉及區分急性BDV感染與慢性和潛伏性感染，通過首先將本發明的方法和由此提供的診斷試劑盒與檢測BDV感染的方法組合，其中由BDV抗原和與其附著的特異性抗體組成的游離循環免疫復合物(CIC)通過免疫學測定進行檢測，例如DE19758017C2所述，其次另外使用檢測BDV感染的方法，其中感染的宿主中游離循環BDV抗體通過免疫學測定進行檢測。因此，根據本發明的診斷試劑盒包括用于檢測BDV CIC的手段和用于檢測BDV抗體的合適的診斷試劑盒。

最后，本發明提供了根據本發明的方法在診斷急性BDV感染和/或病程監測中的應用。特別是與檢測BDV CIC和BDV抗體的方法組合，根據本發明的方法可用于區分急性BDV感染與慢性和潛伏感染和/或病程監測以及排除BDV感染。其同樣適用于人和動物。感染的狀態和感染的過程直接影響對臨床患病個體進行抗病毒治療的可能性。

背景技術

博爾納病病毒(BDV)在分類學上是“博納病毒科”(Bornaviridae)病毒中物種“哺乳動物1博爾納病毒種”(Mammalian 1bornavirus)的引導病毒，屬于“單股反鏈病毒目”(Mononegavirales)。其病毒株從遺傳學角度具有95％以上相同度，在人和許多哺乳動物中感染腦和血細胞并在世界范圍內廣泛傳播。就馬而言，其是博爾納病的病原體。博爾納病毒是包膜病毒(直徑90nm)，含8910千堿基的負義非節段化單鏈(NSS)RNA，其編碼6個基因。博爾納病毒在宿主細胞的核中繁殖，是進化上最古老的病毒之一，其與靈長類祖先共存了至少4000萬年，就其遺傳物質而言甚至在人類身上也留下了永久痕跡。如今，BDV感染發生在許多農場和家畜(包括馬，綿羊，牛，貓)和人類中。其終生保留在被感染的生物體中(持續感染而無細胞破壞)，優先影響就進化而言更老的大腦部分(邊緣系統)并參與行為和情緒變化。

據推測德國三分之一的成年人感染了未被注意的博爾納病毒，即沒有臨床癥狀(Bode and Ludwig,2003)。對于每六分之一的感染個體(16-17％)，一生中遭受精神障礙的風險增加。基于總人口，每二十分之一的人(每100人中有5人；5％)患病的風險增加。猜測最重要的危險因素是長期壓力，其會長期削弱免疫系統并有利于潛伏的博爾納病毒的激活。

博爾納病毒優先影響大腦邊緣系統的神經細胞。這些大腦中樞區域控制行為和情緒并參與學習過程和記憶形成。這種病毒主要在神經細胞中繁殖并可以通過其過程而擴散到整個神經系統。這涉及病毒蛋白N(p40核蛋白)和P(p24磷蛋白)(抗原)的過量形成。在有癥狀患者的大腦中(例如在抑郁癥的情況下)，其會導致大腦信使物質平衡失調(經動物實驗證實)。