[發(fā)明專利]真核細(xì)胞系

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880069487.5
• 申請(qǐng)日: 2018-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN111386126A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 斯特凡諾·科洛卡;阿爾弗雷多·尼科西亞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: NOUSCOM股份公司
• 主分類號(hào): A61K39/12
• 分類號(hào): A61K39/12;C12N5/10;C07K14/005;C12N15/86
• 代理公司: 北京柏杉松知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11413
• 代理人: 王春偉;劉繼富

1.一種細(xì)胞系，其中在細(xì)胞啟動(dòng)子或部分細(xì)胞啟動(dòng)子的控制下表達(dá)四環(huán)素阻遏物(Tet-R)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞系，其中在所述細(xì)胞系的至少90％的細(xì)胞中表達(dá)四環(huán)素阻遏物(Tet-R)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞系，其中表達(dá)隨時(shí)間穩(wěn)定。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中在存在或不存在四環(huán)素或四環(huán)素類似物的情況下，Tet-R抑制在所述細(xì)胞系的啟動(dòng)子中包含了一種或多于一種四環(huán)素操縱子(TetO)的基因的轉(zhuǎn)錄。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中所述Tet-R基因受組成型啟動(dòng)子的控制，優(yōu)選地，所述組成型啟動(dòng)子選自EF1α啟動(dòng)子、PGK-1啟動(dòng)子、泛素B啟動(dòng)子、β-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、EGR1啟動(dòng)子、CASI啟動(dòng)子和CAG啟動(dòng)子。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中對(duì)編碼Tet-R的基因在真核細(xì)胞，優(yōu)選在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行密碼子優(yōu)化。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其還包含

(i)在其基因組中的突變、缺失或插入，所述突變、缺失或插入減少或阻止選自一種或多于一種IFN基因，優(yōu)選cGas和STING的刺激因子、一種或多于一種JAK/STAT轉(zhuǎn)錄激活因子和一種或多于一種IFN刺激基因(ISG)，優(yōu)選PKR、MX1、OAS1、APOBEC3G、TRIM5、ZAP、ISG15、ADAR、IFITM1/2/3、BST2和/或RSAD2的功能蛋白的表達(dá)，和/或

(ii)編碼選擇標(biāo)記的基因，優(yōu)選與編碼Tet-R的基因遺傳連接的G418、潮霉素B、嘌呤霉素、殺稻瘟素或吉?dú)W霉素抗性基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其包含穩(wěn)定整合到其基因組中的編碼四環(huán)素阻遏物(Tet-R)的基因。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞系的細(xì)胞表達(dá)形成感染性病毒顆粒所需的至少一種病毒基因，優(yōu)選其中所述至少一種病毒基因選自E1，優(yōu)選包含具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的基因。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞系的細(xì)胞是人細(xì)胞，優(yōu)選人胚腎細(xì)胞，或其中所述細(xì)胞系的細(xì)胞選自HEK293細(xì)胞、A549細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、MRC5細(xì)胞、VERO細(xì)胞、DF-1細(xì)胞或SK-OV-3細(xì)胞。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中所述啟動(dòng)子是CAG啟動(dòng)子。

12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞系是在ECACC保藏的登記號(hào)為17080901的細(xì)胞系。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞系，還包含病毒基因組，所述病毒基因組能夠組裝成感染性病毒顆粒并且包含受包含一種或多于一種四環(huán)素操縱子(TetO)的啟動(dòng)子控制的至少一個(gè)異源基因，優(yōu)選地，其中

(i)所述病毒基因組選自皰疹病毒基因組、經(jīng)修飾的牛痘安卡拉病毒基因組和腺病毒基因組，優(yōu)選地，病毒基因組是腺病毒基因組，和/或

(ii)所述異源基因是對(duì)細(xì)胞有毒性的或干擾病毒復(fù)制周期。