[發明專利]改進修飾的/突變的細菌螢光素酶

在審

• 申請號: 201880068793.7
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN111315875A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: S.L.蘇科
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12Q1/66
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 甘霖;李唐

描述了與野生型或未修飾的細菌螢光素酶相比具有改進的活性的修飾的或突變的細菌螢光素酶。所述修飾的或突變的細菌螢光素酶展示增加的光產生和/或更慢的信號衰減。采用這些修飾的或突變的細菌螢光素酶通過降低檢測靈敏度來改進發光報道物系統測定，產生改進的生物報道物/報道物測定。本發明進一步提供了用于使用修飾的或突變的細菌螢光素酶的方法，使用修飾的或突變的細菌螢光素酶的報道物測定，以及試劑盒和制品。

發明領域

本公開廣泛地涉及生物報道物/報道物測定的領域。在該領域內，本發明涉及改進的發光報道物系統測定。具體而言，本發明涉及與野生型或親本酶相比展示出增加的光產生和/或更慢的信號衰減的改進的修飾的細菌螢光素酶。采用這些改進的修飾的細菌螢光素酶將通過增加其檢測靈敏度來改進發光報道物系統測定。因此，改進的修飾的細菌螢光素酶允許更有效和靈敏的生物報道物/報道物測定。本發明進一步提供了用于使用修飾的細菌螢光素酶的方法，以及使用修飾的細菌螢光素酶的報道物測定。

發明背景

在生物報道物/報道物測定的領域中，生物發光的使用具有相當的意義和重要性。生物發光，一種化學發光的形式，是由活生物體產生和發出光。生物發光中的主要化學反應涉及發光色素螢光素底物和螢光素酶。螢光素酶催化了螢光素底物的氧化。盡管所有螢光素酶都催化發光反應，但螢光素底物是結構多樣的(參見，Thorne等人，Chem. Biol. 17(6):646-657 (2010))。生物發光在生物學和醫學兩者中具有廣泛的應用。具體而言，生物發光生物體是許多研究領域的靶標。螢光素酶系統廣泛作為報道物基因(其各自通過熒光產生不同的顏色)用于基因工程改造中，并且用于使用生物發光成像的生物醫學研究。此類應用的實例包括螢火蟲螢光素酶基因用于研究轉基因煙草植物、生物發光激活的破壞性實驗性癌癥治療和光遺傳學的用途。因此，生物發光是學術界和工業界中使用的廣泛利用的檢測技術。實際上，在2010年在PubChem數據庫中列出的近2,000個測定中，近似21%是生物發光，且53%是熒光(參見，Thorne，等人，Chem. Biol. 17(6):646-657 (2010))。