[發明專利]改進修飾的/突變的細菌螢光素酶

在審

• 申請號: 201880068793.7
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN111315875A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: S.L.蘇科
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12Q1/66
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 甘霖;李唐

1.與對照細菌螢光素酶相比具有改進的活性的修飾的細菌螢光素酶，其中所述修飾的細菌螢光素酶的LuxA亞基包含與所述對照細菌螢光素酶的LuxA亞基具有至少80%同一性的氨基酸序列，其中所述對照細菌螢光素酶的LuxA亞基具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

2.權利要求1的修飾的細菌螢光素酶，其中所述氨基酸序列在對應于SEQ ID NO:2的位置11、22、102、130、166、168、170、172、218、224、236、261、264、286、308、309或334的位置處包含至少一個氨基酸取代。

3.權利要求1至2中任一項的修飾的細菌螢光素酶，其中改進的活性是與所述對照細菌螢光素酶相比光產生的增加和/或更慢的信號衰減。

4.權利要求1至3中任一項的修飾的細菌螢光素酶，其中：

(a) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置170的氨基酸是R、W或K；

(b) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置102的氨基酸是K；

(c) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置264的氨基酸是D；

(d) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置286的氨基酸是D；

(e) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置22的氨基酸是H；或

(f) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置166的氨基酸是Y。

5.權利要求4的修飾的細菌螢光素酶，其中所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ IDNO:2的位置170的氨基酸是R。

6.權利要求1至5中任一項的修飾的細菌螢光素酶，其中：

(a) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置168的氨基酸是R，且所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置309的氨基酸是T；

(b) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置218的氨基酸是V，且所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置224的氨基酸是R；

(c) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置172的氨基酸是I，且所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置236的氨基酸是R；

(d) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置286的氨基酸是D，且所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置308的氨基酸是D；

(e) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置11的氨基酸是L，且所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置261的氨基酸是D；或

(f) 所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置130的氨基酸是I，且所述修飾的細菌螢光素酶對應于SEQ ID NO:2的位置224的氨基酸是R。

7.權利要求1至6中任一項的修飾的細菌螢光素酶，其中所述氨基酸序列與所述對照細菌螢光素酶的LuxA亞基具有至少90%同一性。

8.重組核酸，其編碼權利要求1至7中任一項的修飾的細菌螢光素酶。

9.權利要求8的重組核酸，其中編碼所述LuxA亞基的核酸序列與SEQ ID NO:1和/或SEQID NO:1的核苷酸1至1065具有至少80%同一性。

10.權利要求9的重組核酸，其中編碼所述LuxA亞基的核酸序列與SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:1的核苷酸1至1065具有至少90%同一性。