[發明專利]數字化親和連接試驗

在審

• 申請號: 201880062829.0
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN111164221A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: B·吉爾多;D·舍茲菲
• 申請（專利權）人: 生物輻射實驗室股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6834
• 分類號: C12Q1/6834;G01N33/53
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;葛臻翼

提供檢測樣品中的分析物的方法。還提供了進行本文所述方法的試劑盒。

本申請要求2017年9月27日提交的美國臨時申請62/564,029的權益，該申請通過引用整體并入本文。

背景技術

來自受試者的樣品中生物分子的定量可為多種臨床應用提供有用的信息。一種檢測和定量生物分子例如蛋白質的方法是通過酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。然而，用該實驗定量的檢測和精確性有限，不足以滿足許多需求。替代技術例如免疫-PCR能夠提高檢測靈敏度，但實際上由于用作檢測劑的抗原的非特異性結合而受到高背景信號的問題限制。

發明內容

本文描述了用于檢測樣品中的靶標的方法，組合物和試劑盒。

在一個實施方式中，檢測樣品中的靶標的方法包括：使樣品接觸與固相載體連接的第一親和劑，其中第一親和劑與靶標(如存在)特異性結合，從而形成與第一親和劑結合的靶標；基于固相載體的存在與否，將與第一親和劑結合的靶標與樣品中未結合的物質分離，從而產生分離的樣品，其包含與第一親和劑結合的靶標；使分離的樣品與包含第一標記物的第二親和劑以及包含第二標記物的第三親和劑接觸，其中第二和第三親和劑特異性與靶標結合，從而形成靶標-標記的親和劑復合物；將靶標-標記的親和劑復合物與未復合的第二和第三親和劑基于固相載體的存在與否分離，從而形成分離的靶標-標記的親和劑復合物；將至少分離的靶標-標記的親和劑復合物分到多個分區內；和通過檢測至少同一個分區內第一和第二標記物的存在檢測靶標在樣品中的存在。

在一些實施方式中，檢測樣品中靶標的方法包括：使樣品接觸與固相載體連接的第一親和劑、包含第一標記物的第二親和劑以及包含第二標記物的第三親和劑，其中第一、第二和第三親和劑與靶標(如存在)特異性結合，從而形成靶標-標記的親和劑復合物；基于固相載體的存在與否，將靶標-標記的親和劑復合物與樣品中未復合的組分分離，從而形成分離的靶標-標記的親和劑復合物；將至少分離的靶標-標記的親和劑復合物分到多個分區內；和通過檢測至少同一個分區內第一和第二標記物的存在檢測靶標在樣品中的存在。

在某些實施方式中，檢測樣品中靶標的方法包括：使樣品接觸包含第一標記物的第二親和劑以及包含第二標記物的第三親和劑，其中第二和第三親和劑與靶標(如存在)特異性結合，從而形成包含靶標、第二親和劑和第三親和劑的第一復合物；使第一復合物和與固相載體連接的第一親和劑接觸，其中第一親和劑與靶標特異性結合，從而形成包含靶標、第一親和劑、第二親和劑和第三親和劑的靶標-標記的親和劑復合物；基于固相載體的存在與否，將靶標-標記的親和劑復合物與未復合的組分分離，從而形成分離的靶標-標記的親和劑復合物；將至少分離的靶標-標記的親和劑復合物分到多個分區內；和通過檢測至少同一個分區內第一和第二標記物的存在檢測靶標在樣品中的存在。

在一些實施方式中，檢測樣品中靶標的方法包括：將多個固相載體與包含靶標(如存在)的樣品中的多個蛋白偶聯，從而形成多個固相載體偶聯物，其中靶標包含至少多個蛋白之一；基于多個固相載體存在與否，將多個固相載體偶聯物與樣品中的未偶聯物質分離，從而形成分離的多個固相載體偶聯物；使分離的多個固相載體偶聯物與包含第一標記物的第一親和劑以及包含第二標記物的第二親和劑接觸，其中第一和第二親和劑與靶標特異性結合，從而形成靶標-標記的親和載體復合物；基于固相載體的存在與否，將靶標-標記的親和劑復合物與未復合的第一和第二親和劑分離，從而產生分離的靶標-標記的親和劑復合物；將至少分離的靶標-標記的親和劑復合物分到多個分區內；和通過檢測至少同一個分區內第一和第二標記物的存在檢測靶標在樣品中的存在。在一些實施方式中，偶聯包括交聯。

在一些實施方式中，分區步驟前從固相載體上切下第一親和劑，從而從固相載體上釋放靶標-標記的親和劑復合物。在一些實施方式中，用序列特異性蛋白酶切下連接第一親和劑與固相載體的氨基酸標簽。在某些實施方式中，蛋白酶是TEV、因子Xa或凝血酶。在一些實施方式中，固相表面和第一親和劑之間的光可切割的接頭通過暴露于光而切割。

在一些實施方式中，分離的靶標-標記的親和劑復合物分到多個分區前，交聯靶標-標記的親和劑復合物。