[發明專利]數字化親和連接試驗

在審

• 申請號: 201880062829.0
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN111164221A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: B·吉爾多;D·舍茲菲
• 申請（專利權）人: 生物輻射實驗室股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6834
• 分類號: C12Q1/6834;G01N33/53
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;葛臻翼

1.檢測樣品中分析物的方法，所述方法包括：

使樣品接觸與固相載體連接的第一親和劑，其中第一親和劑與靶標(如存在)特異性結合，從而形成與第一親和劑結合的靶標；

基于固相載體的存在與否，將與第一親和劑結合的靶標與樣品中未結合的物質分離，從而產生分離的樣品，其包含與第一親和劑結合的靶標；

使分離的樣品與包含第一標記物的第二親和劑以及包含第二標記物的第三親和劑接觸，其中第二和第三親和劑特異性結合于靶標，從而形成靶標-標記的親和劑復合物；

基于固相載體的存在與否，將靶標-標記的親和劑復合物與未復合的第二和第三親和劑分離，從而形成分離的靶標-標記的親和劑復合物；

將至少分離的靶標-標記的親和劑復合物分到多個分區內；和

通過檢測至少同一個分區內第一和第二標記物的存在檢測靶標在樣品中的存在。

2.如權利要求1所述的方法，其中第一標記物是第一核酸標記物，第二標記物是第二核酸標記物。

3.如權利要求2所述的方法，其中在分區后擴增第一和第二核酸標記物。

4.如權利要求3所述方法，其中第一和第二核酸標記物各自用嵌入染料或選自TAQMAN^TM探針、SCORPION^TM探針、ECLIPSE^TM探針、分子信標探針、雙鏈探針、雙重雜交探針或雙淬滅探針的DNA探針檢測。

5.如權利要求4所述的方法，其中用同一DNA探針或嵌入染料的不同信號水平檢測第一和第二核酸標記物。

6.如權利要求1所述的方法，其中第一標記物和第二標記物各自與鏈霉親和素連接，第二和第三親和劑生物素化，和其中在方法的第一步之前，第一和第二鏈霉親和素連接的標記物與生物素化的第一和第二親和劑各自通過鏈霉親和素-生物素相互作用偶聯。

7.如權利要求1所述的方法，其中第一親和劑生物素化，固相載體與鏈霉親和素連接，其中在方法的第一步前，鏈霉親和素連接的固相載體通過鏈霉親和素-生物素相互作用與生物素化的第一親和劑連接。

8.如權利要求1-7任一所述的方法，其中第一標記物產生第一信號，第二標記物產生第二信號，第一信號和第二信號可分辨。

9.如權利要求1-8任一所述的方法，其中固相載體或多個固相載體選自磁珠、非磁性珠、或反應容器表面。

10.如權利要求1所述的方法，其中固相載體或多個固相載體包括磁珠，靶標-標記的親和劑復合物與樣品中未復合的組分用磁鐵通過吸引靶標-標記的親和劑復合物中與第一親和劑連接的磁珠而分離。

11.任何前述權利要求任一所述的方法，其中靶標選自蛋白質、蛋白質聚集物、和蛋白質寡聚物。

12.如權利要求1-10任一所述的方法，其中靶標是兩種或多種相互作用蛋白的復合物，而第二和第三親和劑各自與復合物中的相互作用蛋白之一結合，該方法還包括計算相互作用伴侶的結合親和力(KD)。

13.如先前權利要求任一所述的方法，其中第一、第二和第三親和劑中的每一種與靶標上的不同表位特異性結合。

14.如前權利要求任一所述的方法，其中第一、第二和第三親和劑各自選自抗體、抗體片段和核酸適體。

15.如權利要求14所述的方法，其中抗體是單克隆抗體和/或多克隆抗體。

16.如前權利要求任一所述的方法，還包括確定同時包含第一和第二標記物的分區數量，從而定量靶標。