[發明專利]通過質譜法進行的載脂蛋白E同種型檢測

在審

• 申請號: 201880062552.1
• 申請日: 2018-07-31
• 公開（公告）號: CN111148998A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: D·韋柏;N·克拉克
• 申請（專利權）人: 奎斯特診斷投資有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 董志勇

提供了通過質譜法確定樣品中載脂蛋白E(ApoE)表型的方法；其中由通過質譜法檢測到的離子身份確定樣品中存在的ApoE的等位基因(一種或多種)。在另一方面，本文提供了用于診斷或預后阿爾茨海默氏病或癡呆的方法。

技術領域

本發明涉及載脂蛋白E的檢測或定量。在具體方面，本發明涉及通過質譜法檢測載脂蛋白E或其等位基因的方法。

背景技術

阿爾茨海默氏病是影響老年人群的最常見的癡呆形式。阿爾茨海默氏病的特征在于認知能力具體地是記憶和學習能力的逐漸衰退。載脂蛋白E(APOE)與發生阿爾茨海默氏病的明顯增加相關聯。人類APOE基因具有三個多態等位基因ε2、ε3和ε4，它們導致六種不同的表型：ε2/ε2、ε2/ε3、ε3/ε3、ε2/ε4、ε3/ε4和ε4/ε4。

目前用于預測或診斷阿爾茨海默氏病的臨床診斷方法的準確度和靈敏度較低。需要用于檢測載脂蛋白E的準確和靈敏的測定。具體地，需要用于檢測多種同工型(isoform)的準確和靈敏的測定。

發明內容

本文提供了通過包括串聯質譜法在內的質譜法檢測或確定樣品中載脂蛋白E(APOE)的量的方法。

在某些實施方式中，本文提供的方法用于檢測或確定載脂蛋白E的量，其包括：(a)純化樣品中的載脂蛋白E；(b)電離樣品中的載脂蛋白E；(c)通過質譜法檢測或確定載脂蛋白E離子(一種或多種)的量；其中載脂蛋白E離子(一種或多種)的量與樣品中載脂蛋白E的量有關。

在某些實施方式中，本文提供的方法用于確定樣品中載脂蛋白E(ApoE)表型，所述方法包括：(a)純化樣品中的ApoE；(b)電離樣品中的ApoE以產生一種或多種ApoE離子；(c)通過質譜法檢測來自步驟(b)的離子(一種或多種)；其中樣品中存在的ApoE等位基因(一種或多種)由步驟(c)中檢測到的離子的身份來確定。

在一些實施方式中，本文提供的純化包括液相色譜法。在一些實施方式中，液相色譜包括高效液相色譜法(HPLC)。

在一些實施方式中，樣品中的ApoE被消化。在一些實施方式中，ApoE被胰蛋白酶消化。在一些實施方式中，被消化的ApoE是微波處理的。在一些實施方式中，通過快速酶消化微波技術消化ApoE。

在一些實施方式中，本文提供的純化包括固相萃取(SPE)。

在一些實施方式中，電離包括電噴霧電離(ESI)。在一些實施方式中，電離包括以正模式電離。在一些實施方式中，電離包括以負模式電離。

在一些實施方式中，本文提供的方法進一步包括添加內標。在一些實施方式中，內標是同位素標記的。

在一些實施方式中，通過本文提供的方法確定的表型是ApoE2/ApoE2。在一些實施方式中，表型是ApoE2/ApoE3。在一些實施方式中，表型是ApoE2/ApoE4。在一些實施方式中，表型是ApoE3/ApoE3。在一些實施方式中，表型是ApoE3/ApoE4。在一些實施方式中，表型是ApoE4/ApoE4。