[發(fā)明專利]用于將核酸偶聯(lián)至官能化的載體的方法和組合物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880058806.2
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN111094318A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: L·喬伯特
• 申請（專利權(quán)）人: 生命技術(shù)股份公司
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C12N15/10;C12Q1/6834
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 傅宇昌

1.一種用于將核酸偶聯(lián)至載體的方法，所述方法包括：

(a)提供載體，所述載體在其上包含羧酸基團，

(b)提供核酸，其中所述核酸包含至少一個伯胺官能團，

(c)通過使在載體上的羧酸基團與碳二亞胺或其衍生物接觸以形成反應(yīng)性酸酐來活化所述載體，

(d)使所述反應(yīng)性酸酐與所述核酸的至少一個伯胺官能團反應(yīng)以形成共價酰胺鍵，由此將所述核酸偶聯(lián)至所述載體，

其中在有機溶劑存在下進行步驟(c)和(d)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在鹽存在下進行步驟(c)和(d)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述鹽是無機鹽。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3中任一項所述的方法，其中所述鹽是LiCl或NaCl。

5.根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項所述的方法，其中所述鹽以至少約0.1M且小于約1.0M或至少約0.2M且小于約0.8M的濃度存在于步驟(c)和/或(d)中。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至5中任一項所述的方法，其中在用在步驟(c)中之前，將所述鹽溶解在有機溶劑中。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述有機溶劑選自二甲基亞砜、二甲基甲酰胺和二乙基亞砜或其混合物。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述有機溶劑以每總體積至少約50％且小于95％的濃度存在于步驟(c)和/或步驟(d)中。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在有水或水性緩沖液存在下進行步驟(c)和/或步驟(d)，其中所述水或水性緩沖液的濃度是每總體積小于20％，優(yōu)選地小于10％。

10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述碳二亞胺是EDC。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在用在步驟(c)中之前，將所述碳二亞胺或其衍生物溶解在水性緩沖液中。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述水性緩沖液是MES或咪唑緩沖液。

13.根據(jù)權(quán)利要求11或權(quán)利要求12所述的方法，其中所述水性緩沖液包含在約5.0和約7.0之間的pH。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在約4.5和約7.0之間的pH執(zhí)行步驟(c)和/或(d)。

15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在用在步驟(c)中之前，在有機溶劑中提供所述載體。

16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在用在步驟(d)中之前，在有機溶劑中提供所述核酸。

17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在步驟(c)中活化所述載體之前，將所述核酸與所述載體組合。

18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在步驟(c)中活化所述載體之后，將所述核酸與所述載體組合。

19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中以約10和約10,000pmol/mg載體之間或約50和約5,000pmol/mg載體之間的濃度提供所述核酸。

20.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在室溫執(zhí)行步驟(c)和(d)。