[發明專利]利用疏水相互作用分離細胞外囊泡的方法

在審

• 申請號: 201880058719.7
• 申請日: 2018-07-26
• 公開（公告）號: CN111065730A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 李昌津;高用松;樸鉉澤
• 申請（專利權）人: 羅塞塔外排體株式會社
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;B01D15/36
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;呂學辰

1.一種分離細胞外囊泡的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)將疏水性官能團固定在固定相上；

(b)將含有細胞外囊泡的樣品上樣至固定相，使細胞外囊泡與疏水性官能團結合；

(c)洗去固定相上未結合疏水性官能團的殘留的剩余樣品；和

(d)從固定相洗脫結合至疏水性官能團的細胞外囊泡。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括在步驟(b)之前用含有鹽析離子的溶液洗滌其上具有疏水性官能團的固定相的步驟。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述鹽析離子具有適于控制所述固定相的疏水性以使所述細胞外囊泡結合至所述固定相的濃度。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述鹽析離子的濃度范圍為0M至10M。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括以下步驟：在將含有細胞外囊泡的樣品上樣至固定相的步驟(b)之前，將含有鹽析離子的溶液添加到所述樣品中，以改變所述樣品中含有的鹽析離子的種類或濃度。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括在洗脫細胞外囊泡的步驟(d)之前，控制鹽析離子的種類或濃度以除去疏水相互作用強度小于細胞外囊泡的物質的步驟。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，用于除去疏水相互作用強度小于細胞外囊泡的物質的所述鹽析離子的濃度被控制在0M至10M的范圍內。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述鹽析離子選自硫酸鹽、磷酸鹽、氫氧化物、氟化物、甲酸鹽、乙酸鹽、氯化物、溴化物、硝酸鹽、碘化物、硫氰酸鹽、檸檬酸鹽和酒石酸鹽組成的群組中的至少一種。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定相選自由瓊脂糖珠、瓊脂糖凝膠珠、葡聚糖珠、二氧化硅珠、磁珠、金納米顆粒、銀納米顆粒、氧化鐵納米顆粒、尼龍膜、硝酸纖維素膜、PVDF膜、紙、塑料、玻璃和金屬傳感器芯片組成的群組中的至少一種。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述疏水性官能團選自由丁基、氰基丁基、辛基、苯基和聯苯組成的群組中的至少一種。

11.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品選自由哺乳動物細胞培養物、細菌細胞培養物、酵母培養物、組織提取物、癌組織、血清、血漿、唾液、淚液、鼻粘液、汗液、尿液、糞便、腦脊液、腹水、羊水、支氣管肺泡灌洗液、胸腔積液、精液、牛奶、灰塵、淡水、海水、土壤和發酵食品組成的群組中的至少一種。

12.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括在將含有細胞外囊泡的樣品上樣至固定相的步驟(b)之前，對所述含有細胞外囊泡的樣品進行預處理的步驟。

13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述預處理的步驟為實施選自離心、超離心、過濾、超濾、透析、脫鹽柱層析、超聲處理、密度梯度離心、尺寸排阻層析、離子交換層析、親和層析、沉淀和雙液相體系中的一個技術。

14.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括對來自步驟(d)的洗脫液中的細胞外囊泡進行后處理的步驟。

15.權利要求14所述的方法，其特征在于，所述后處理的步驟為實施選自離心、超離心、過濾、超濾、透析、脫鹽柱層析、超聲處理、密度梯度離心、尺寸排阻層析、離子交換層析、親和層析、沉淀和雙液相體系中的一個技術。

16.利用權利要求1至15中任一項中所述的方法分離的細胞外囊泡。