[發明專利]拉曼成像技術測定抗生素敏感性的方法

在審

• 申請號: 201880058493.0
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN111133295A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 程繼新;穆罕默德·塞勒姆;洪偉力
• 申請（專利權）人: 普渡研究基金會
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N33/58;C12N5/02
• 代理公司: 長沙楚為知識產權代理事務所(普通合伙) 43217
• 代理人: 李大為

1.一種用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，包括：

制備細菌固定化凝膠；在具有營養源的培養基中培養所述細菌；

將預選的抗生素添加到所述培養基中；

將所述抗生素和細菌在培養基中孵育一段預定的時間以形成樣品；

離心所述樣品；

洗滌所述樣品；

將所述樣品沉積在所述細菌固定化凝膠上；

通過相干拉曼顯微鏡在所述細菌固定化凝膠上收集樣品的圖像。

2.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，通過超光譜相干拉曼顯微鏡采集樣品圖像。

3.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，通過單頻相干拉曼顯微鏡采集樣品圖像。

4.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述固定化凝膠由瓊脂糖凝膠組成。

5.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述營養源具有單一的碳源，所述營養源僅由0.1-10％的葡萄糖-d7組成。

6.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述營養源由含有0-100％二氧化氘的培養基組成。

7.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述營養源由葡萄糖-d7和二氧化氘組成。

8.根據權利要求1所述的用于測定細菌對抗生素敏感性的方法，其特征在于，所述拉曼顯微鏡收集樣品的圖像為拉曼成像，所述拉曼成像可以是受激拉曼散射成像、相干反斯托克斯拉曼散射成像或相干拉曼誘導的克爾效應成像。

9.一種用于收集抗生素敏感性測試圖像的超光譜受激拉曼散射成像設備，其特征在于，所述設備包括：

具有80MHz重復率的雙輸出飛秒脈沖激光器，所述雙輸出飛秒脈沖層包括：

泵浦光束；

斯托克斯光束；

所述斯托克斯光束路徑由聲光調制器調制；

所述泵浦光束路徑具有平移臺以調諧所述泵浦光束和所述斯托克斯光束之間的延遲；

組合器，所述組合器用于組合所述泵浦光束和所述斯托克斯光束；

激光掃描顯微鏡，所述激光掃描顯微鏡具有用于將泵浦光束和斯托克斯光束聚焦在樣品上的物鏡；

油冷凝器，所述油冷凝器用于從所述樣品收集激光；

濾光器，所述濾光器位于所述聚光器之后，并且用于濾除所述斯托克斯光束；

光電二極管，所述光電二極管位于濾光器之后，用于檢測泵浦光束；

鎖定放大器，所述鎖定放大器用于提取泵浦光束信號損耗。

10.根據權利要求9所述的用于收集抗生素敏感性測試圖像的超光譜受激拉曼散射成像設備，其特征在于，還包括啁啾裝置，所述啁啾裝置用于在斯托克光束和泵浦光束之間形成不同的脈沖持續時間。

11.根據權利要求10所述的用于收集抗生素敏感性測試圖像的超光譜受激拉曼散射成像設備，其特征在于，所述啁啾裝置是兩個15厘米長的SF57玻璃棒

12.根據權利要求9所述的用于收集抗生素敏感性測試圖像的超光譜受激拉曼散射成像設備，其特征在于，使用一對濾光片。

13.根據權利要求9所述的用于收集抗生素敏感性測試圖像的超光譜受激拉曼散射成像設備，其特征在于，所述激光掃描顯微鏡的物鏡為60倍的水物鏡。

14.根據權利要求9所述的用于收集抗生素敏感性測試圖像的超光譜受激拉曼散射成像設備，其特征在于，所述泵浦光束的脈沖持續時間在1.5和2ps之間，所述斯托克斯光束的脈沖持續時間在1.0和1.4ps之間。