[發明專利]基于前列腺特異性膜抗原的前列腺癌患者篩查方法

有效

• 申請號: 201880055755.8
• 申請日: 2018-07-17
• 公開（公告）號: CN111065920B
• 公開（公告）日: 2023-02-21
• 發明（設計）人: 全炳熙
• 申請（專利權）人: 西托根有限公司
• 主分類號: G01N33/483
• 分類號: G01N33/483;G01N33/574;G01N21/64;G01N15/00;G01N15/14
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

1.與血中循環癌細胞特異性結合的熒光標記物及與前列腺特異性膜抗原特異性結合的熒光標記物在制備用于在前列腺癌患者體外篩查方法中使用的試劑盒中的用途，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

從預先獲得自癌癥患者的血液樣本中利用生物芯片來分離循環癌細胞的步驟；

對所述分離的循環癌細胞執行從開始培養起1至15天的短期培養的步驟；

將分離的所述血中循環癌細胞和與血中循環癌細胞特異性結合的熒光標記物及與前列腺特異性膜抗原特異性結合的熒光標記物進行反應的步驟；

將與所述熒光標記物進行反應的血中循環癌細胞及前列腺特異性膜抗原作為對象接收多個波長范圍的各個光學圖像的步驟；

在所述多個波長范圍的整個或一部分光學圖像中測定所述血中循環癌細胞及所述前列腺特異性膜抗原的熒光強度來執行第一次過濾的步驟；

在所述多個波長范圍的整個或一部分光學圖像中測定所述血中循環癌細胞的形態學來執行第二次過濾的步驟；以及

在將所述多個波長范圍的各個光學圖像中的整個或一部分合并的整合圖像中測定所述血中循環癌細胞的形態學來執行第三次過濾的步驟；

其中所述生物芯片為由牛血清白蛋白溶液涂敷的高密度微芯片，

其中所述高密度微芯片具有尺寸特異性，

其中所述短期培養中使用的培養基由胰島素、轉鐵蛋白、表皮生長因子和Rho激酶抑制劑組成，

其中所述Rho激酶抑制劑選自由法舒地爾(Fasudil)、利帕舒地爾(Ripasudil)、RKI-1447及Y27632組成的組中的至少一種，

其中所述培養基中的胰島素的含量是5至30ng/ml，

其中所述培養基中的轉鐵蛋白的含量是5至30ng/ml，

其中所述培養基中的表皮生長因子的含量是1至5ng/ml，

其中所述培養基中的Rho激酶抑制劑的含量是5至20μM，

其中在所述短期培養中使用的培養板涂覆有水凝膠。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，與所述血中循環癌細胞特異性結合的熒光標記物為選自由對波形蛋白表示特異性的抗體、對上皮細胞粘附分子表示特異性的抗體及對細胞角蛋白表示特異性的抗體組成的組中的至少一種。

3.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，在接收所述光學圖像的步驟中，所述多個波長范圍下的光學圖像包括藍色波長范圍圖像、綠色波長范圍圖像及紅色波長范圍圖像。

4.根據權利要求3所述的用途，其特征在于，在所述藍色波長范圍圖像中執行所述第一次過濾的步驟及執行所述第二次過濾的步驟來判別血中循環癌細胞的細胞核。

5.根據權利要求3所述的用途，其特征在于，在所述綠色波長范圍圖像和所述紅色波長范圍圖像中的一個以上圖像中執行所述第一次過濾的步驟來判別血中循環癌細胞的細胞膜。

6.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述血中循環癌細胞的形態學包括細胞面積、細胞大小及真圓度中的一個以上。

7.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，執行所述第一次過濾的步驟包括：

在所述多個波長范圍的整個或一部分光學圖像中測定血中循環癌細胞的大小的步驟；以及

設定由相比于測定的所述血中循環癌細胞的大小大預先設定的比率或量的多邊形或圓形成的區域，并在所述區域內測定血中循環癌細胞的熒光強度來執行第一次過濾的步驟。

8.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，分離所述血中循環癌細胞的步驟在大氣壓為1000至1020hPa的條件下實現。

9.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述牛血清白蛋白溶液以0.05至0.15％的濃度進行涂敷。