[發明專利]原代培養方法

在審

• 申請號: 201880053730.4
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN111051495A
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 高橋祐生;北野史朗;片山量平;長山聰
• 申請（專利權）人: 凸版印刷株式會社;公益財團法人癌研究會
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N1/00;C12N5/07
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 白麗

本發明提供一種原代培養方法，其是在體外對從生物體采集的組織中所含的細胞進行原代培養的原代培養方法，其中，將從生物體采集的組織中的細胞接種至含有構成間質的細胞、且單層的或2個以上的細胞層在厚度方向上層疊的細胞結構體的頂面上，進行培養。

技術領域

本發明涉及對從生物體采集的組織中的細胞進行原代培養的方法。本發明特別是涉及對癌癥患者的腫瘤組織來源的癌細胞進行原代培養的方法。

本申請基于2017年8月21日在日本提出申請的日本特愿2017-158901號主張優先權，將其內容援引至此。

背景技術

一直以來，在癌癥研究中，使用在最適于培養的條件下進行傳代培養而建立的細胞株的實驗是主流。但是，長年來在生物體外維持、被持續培養的癌細胞株與原本的患者腫瘤組織相比，性質發生了變化，有可能無法說是充分地反映了生物體內的行為。于是，為了開發精度更高的抗癌劑、選擇最適于每個患者的治療，癌細胞的原代培養被認為是有希望的。

例如，非專利文獻1中介紹了使用原代培養細胞的CD-DST(Collagen gel dropletembedded drug sensitivity test，膠原凝膠微滴包埋藥敏試驗)法。該試驗法是將從患者分離出的組織或細胞在膠原凝膠內進行包埋培養并進行驗證的藥物敏感性試驗。但是，對于原代培養細胞，很難說已經確立了培養法，培養成功率低成為課題。

作為從患者腫瘤組織對癌細胞進行原代培養的方法，為了抑制伴隨細胞分散的細胞死亡(凋亡)，提出了在培養基中添加作為ROCK抑制劑的Y-27632的方法(非專利文獻2)、或者獲得在維持著細胞間黏附的狀態下的一定尺寸的細胞團塊并進行懸浮培養的方法(專利文獻1)。這些培養法中，使用在干細胞用的無血清培養基中添加了血清代替物或各種增殖因子的培養基。但是，一般來說，干細胞用無血清培養基除了價格昂貴之外，還有在人為地大量添加有增殖因子的生長環境中將不同于實際生物體內的信號通路亢進或抑制的可能性。在這種環境下，特別是在使用了分子靶向藥物的敏感性試驗等中，有可能獲得與實際生物體內不同的結果。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本專利第5652809號公報

非專利文獻

非專利文獻1：Takamura et al.,International Journal of Cancer,2002,Vol.98,p.450-455.

非專利文獻2：Zhang L et al.,PLOS ONE,2011,vol.6,p.18271.

非專利文獻3：Nishiguchi et al.,Macromol Bioscience,2015,vol.15(3)，p.312-317.

發明內容

發明要解決的技術問題

本發明的目的在于提供不特別地添加增殖因子或任何抑制劑、使用通常的細胞培養中使用的培養用培養基對從生物體采集的組織(生物體組織)中的細胞進行原代培養的方法。

用于解決技術問題的手段

本發明人們為了解決上述技術問題反復進行深入研究時發現，當在細胞外對從生物體采集的組織中的細胞進行培養時，在培養的初期，間質的存在是很重要的，從而完成了本發明。

[1]本發明第一方式的原代培養方法是在體外對從生物體采集的組織中所含的細胞進行原代培養的原代培養方法，其中，將從生物體采集的組織中的細胞接種至含有構成間質的細胞、且單層的或2個以上的細胞層在厚度方向上層疊的細胞結構體的頂面上，進行培養。