[發(fā)明專利]原代培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880053730.4
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN111051495A
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高橋祐生;北野史朗;片山量平;長山聰
• 申請（專利權(quán)）人: 凸版印刷株式會社;公益財團(tuán)法人癌研究會
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N1/00;C12N5/07
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002
• 代理人: 白麗

1.一種原代培養(yǎng)方法，其是在體外對從生物體采集的組織中所含的細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)的原代培養(yǎng)方法，其中，

將從生物體采集的組織中的細(xì)胞接種至含有構(gòu)成間質(zhì)的細(xì)胞、且單層的或2個以上的細(xì)胞層在厚度方向上層疊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)體的頂面上，進(jìn)行培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原代培養(yǎng)方法，其中，將從所述生物體采集的所述組織的碎片化物、從所述生物體采集的所述組織的酶處理物、或者由從所述生物體采集的所述組織中回收的細(xì)胞接種在所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體的所述頂面來進(jìn)行培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的原代培養(yǎng)方法，其中，所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體含有選自成纖維細(xì)胞、周細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及免疫細(xì)胞中的1種以上作為構(gòu)成所述間質(zhì)的細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的原代培養(yǎng)方法，其中，所述內(nèi)皮細(xì)胞是選自血管內(nèi)皮細(xì)胞及淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞中的1種以上。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任一項所述的原代培養(yǎng)方法，其中，所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體具備脈管網(wǎng)結(jié)構(gòu)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任一項所述的原代培養(yǎng)方法，其中，所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體的厚度為5μm以上。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任一項所述的原代培養(yǎng)方法，其中，所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體的厚度為150μm以上。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項所述的原代培養(yǎng)方法，其中，從所述生物體采集的所述組織含有腫瘤組織。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的原代培養(yǎng)方法，其中，

在將從所述生物體采集的所述組織進(jìn)行碎片化之后，從所得的碎片化物中分選出癌細(xì)胞，

將分選出的所述癌細(xì)胞接種在所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體的所述頂面上來進(jìn)行培養(yǎng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的原代培養(yǎng)方法，其中，在從所述碎片化物中分選所述癌細(xì)胞時，利用選自流式細(xì)胞儀、磁性分離、介電泳、尺寸分級及密度梯度分級中的1種以上的手法來分選所述癌細(xì)胞。

11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任一項所述的原代培養(yǎng)方法，其中，通過以下工序來構(gòu)筑所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)體：

在陽離子性緩沖液中，將至少含有構(gòu)成間質(zhì)的細(xì)胞的細(xì)胞與強(qiáng)電解質(zhì)高分子及細(xì)胞外基質(zhì)成分混合，獲得混合物的工序(a)；

將通過所述工序(a)獲得的所述混合物接種在細(xì)胞培養(yǎng)容器中的工序(b)；以及

在所述工序(b)后，在所述細(xì)胞培養(yǎng)容器中獲得至少含有構(gòu)成間質(zhì)的細(xì)胞的細(xì)胞多層地層疊而成的細(xì)胞結(jié)構(gòu)體的工序(c)。

12.一種含原代培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)體，其在含有構(gòu)成間質(zhì)的細(xì)胞、且單層的或2個以上的細(xì)胞層在厚度方向上層疊的間質(zhì)細(xì)胞層的頂面上具備由從生物體采集的組織中所含的細(xì)胞形成的細(xì)胞層。