[發明專利]用于用表達LEKTI的重組微生物治療內瑟頓綜合征的組合物和方法

在審

• 申請號: 201880052930.8
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN111050850A
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: T.M.懷特菲爾;A.M.穆尼瓦
• 申請（專利權）人: 阿茲特拉公司
• 主分類號: A61P17/00
• 分類號: A61P17/00;C07K14/81;C12N15/74
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;黃希貴

本公開內容尤其提供表達重組LEKTI結構域的經工程改造的微生物，所述重組LEKTI結構域有效治療或改善內瑟頓綜合征的癥狀。在某些實施方案中，提供包含表達LEKTI結構域的微生物的組合物、方法和試劑盒。

相關申請

本申請要求于2017年6月16日提交的美國臨時申請62/521,050的優先權，所述臨時申請的全部內容通過引用以其整體結合到本文中。

公開內容的領域

本公開內容涉及用于使用經遺傳修飾以在受試者的皮膚上表達一個或多個治療性LEKTI結構域的一種或多種重組微生物治療內瑟頓綜合征(Netherton Syndrome)或改善其影響的方法、試劑盒和組合物。

發明背景

表皮是皮膚的鱗狀復層上皮，由多個亞層組成，是身體抵抗外界的最重要屏障之一。角質層是表皮的最外層，由于角質形成細胞從有核表皮層中的細胞分化的最終無核步驟而形成。盡管認為角質層是最重要的物理屏障，但有核表皮層在屏障功能上也重要(Proksch，Brandner等2008)。總之，皮膚屏障保護免于一個方向上的大量水分流失(內外屏障)和免于來自環境中的有害物質入侵(外內屏障)(Proksch，Brandner等，2008)。屏障的維持對于基底層的平衡增殖和鈣離子梯度的保持以及因此適當的表皮分化也重要(Lee, Jeong等2006)。

在皮膚治療中存在許多當前的局限性。許多治療，例如局部皮質類固醇或生物制劑，不治療表皮中缺乏固有蛋白質或皮膚中微生物多樣性失衡的根本問題。盡管重組蛋白在皮膚疾病的治療中代表著有希望的一組治療劑，但其在皮膚情況下的使用伴隨著一些問題。

傳統方法純化和濃縮從細菌系統中提取的重組蛋白，然后將這樣的制備物摻入遞送系統中。重組蛋白的純化常常是非常昂貴的獲得蛋白的方法。此外，與這些傳統方法關聯許多問題，包括蛋白水解降解、無效率的遞送和需要超時重復施用以達到治療效果。

將會受益于改善的治療方式的一種皮膚疾病為內瑟頓綜合征(NS)。NS是一種罕見的常染色體皮膚疾病，表現為嚴重的皮膚炎癥和脫屑、毛干缺陷、持續的過敏癥狀和免疫系統問題。患有NS的新生兒經常有紅色和鱗屑狀的皮膚，其可能滲漏液體，這造成皮膚或整個身體脫水和感染的風險。患病兒童也可能無法以正常速度生長。患有NS的較大兒童和成年人的健康通常改善，但那些個體常常體重不足且身材矮小。大多數具有NS的人也有免疫系統問題，例如食物過敏、枯草熱、哮喘或濕疹。

NS由基因SPINK5 (5型kazal絲氨酸蛋白酶抑制劑)的功能喪失缺陷引起，該基因編碼5型淋巴上皮kazal型相關抑制劑(LEKTI)蛋白。LEKTI為多結構域絲氨酸蛋白酶抑制劑，正常地在所有分層的上皮細胞和胸腺的Hassal小體中表達。編碼LEKTI的SPINK5基因位于5號染色體上其它SPINK基因(例如SPINK6和SPINK9)的簇中，包含33個外顯子，其編碼由接頭區域分隔的15個抑制結構域。SPINK5由于其編碼的大量抑制結構域而在其它SPINK基因中脫穎而出。此外，SPINK5基因被轉錄成三種不同的轉錄物，導致C端區域不同的三種不同的LEKTI蛋白；即具有抑制結構域D1-D15的145 kDa全長蛋白、具有抑制結構域D1-D12的125 kDa (短)蛋白和具有擴展的接頭區域13的148 kDa (長)蛋白。

LEKTI蛋白為Kazal型相關抑制劑。Kazal基序通過存在6個半胱氨酸殘基定義，這些殘基以特定的距離定位以允許以1-5、2-4和3-6模式形成三個二硫鍵。LEKTI的兩個結構域(D2和D5)形成了這6個半胱氨酸基序，而其它結構域共享四個半胱氨酸殘基，其產生一個剛性抑制環，認為該環模擬靶蛋白酶的底物并使靶蛋白酶催化位點失活。