[發明專利]X型膠原α1測定法

在審

• 申請號: 201880050169.4
• 申請日: 2018-07-27
• 公開（公告）號: CN111742221A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: Y·何;A-C·B·杰森;M·卡爾斯戴爾
• 申請（專利權）人: 北歐生物科技公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K16/18;G01N33/564
• 代理公司: 余姚德盛專利代理事務所(普通合伙) 33239
• 代理人: 周積德

與氨基酸序列H₂N?GIATKGLNGP中包含的X型膠原α1的N末端新表位特異性反應的抗體、及其在評估與X型膠原α1相關的疾病(例如骨關節炎)的免疫分析中的用途。

技術領域

本發明涉及與X型膠原α1的N末端新表位特異性反應的抗體、及其在檢測和定量X型膠原α1的免疫測定方法中的用途。

背景技術

骨關節炎(OA)是一種常見的關節疾病，其特征是軟骨損傷和關節功能喪失。OA的病因包括多種因素，包括衰老、肥胖、外傷和遺傳[1]。由于該疾病的異質性和復雜性，人們對OA的發病機理了解甚少。

值得注意的是，OA的某些特征類似于軟骨內骨化在骨骼發育過程中的軟骨細胞分化過程。在健康的關節軟骨中，軟骨細胞抵抗增殖和終末分化。相比之下，患病軟骨中的軟骨細胞逐漸增生并肥大。此外，開始了關節軟骨的血管化和局部鈣化[2-5]。調節軟骨細胞分化的分子事件仍然是未知的，但是OA中軟骨細胞肥大樣變化已引起更多研究關注[6-8]。

X型膠原α1

X型膠原α1是非原纖維，但與軟骨膠原蛋白結合形成細小的細胞細絲。從軟骨細胞培養物中或從軟骨分離的分子是59kDa X型膠原α1鏈的同三聚體，并且已經報道了約75kDa的X型膠原的重組分子[9]。X型膠原α1與VIII型膠原蛋白具有相似的結構域結構：50kDa的中央三螺旋(COL1)域位于N末端(NC2)和C末端(NC1)非三螺旋域[10]。另外，兩種膠原類型都代表六邊形晶格結構的主要成分，其中膠原分子通過涉及非三螺旋末端區域的相互作用而連接在一起。

X型膠原α1分布僅限于長骨，椎骨和肋骨的生長區以及成年(21歲)甲狀腺軟骨的正常胎兒肥大性軟骨，在這種情況下，由于軟骨基質的存在，它可能會提供一個支架以防止局部塌陷軟骨內骨化過程中去除[11]。它也存在于骨折、骨關節炎軟骨和成軟骨腫瘤中，并且可能與軟骨礦化有關。

骨關節炎

OA通常被認為是滑膜關節(主要是膝蓋和臀部)的非炎性疾病。軟骨細胞肥大和軟骨鈣化是OA的關鍵病理事件。網絡形成的X型膠原蛋白的高表達被認為是軟骨細胞肥大的特定信號[12-15]，因此，X型膠原蛋白可用作所述疾病的可檢測標記。

有幾種與肥大軟骨細胞相關的蛋白質，例如X型膠原、MMP13、骨橋蛋白、骨鈣素[16]、Indian Hedgehog[17]、Runx2[18]、VEGF[19]、HtrA1[20]和轉谷氨酰胺酶-2(TG-2)[21]。X型膠原和MMP13是最肥大的軟骨細胞標記。然而，MMP13的合成可通過炎癥和機械應力在軟骨細胞中誘導[22-23]。因此，作為肥大性軟骨細胞特異性標志物的X型膠原蛋白可以表明軟骨細胞的表型改變。

下因此，準確地定量生物樣品中的X型膠原蛋白或其片段的量的方法可以允許更好地理解X型膠原蛋白的病理學或影響X型膠原蛋白周轉的諸如OA的生理過程。顯然，需要這種方法。

發明概述

發明人現已發現，組織蛋白酶K在⁴⁷⁸A-G⁴⁷⁹之間的肽鍵處裂解X型膠原α1，從而導致形成N末端新表位生物標記H₂N-⁴⁷⁹GIATKGLNGP(SEQ ID NO:1)。X型膠原α1的這種新表位生物標記物已顯示與骨關節炎良好相關。

因此，本發明的第一方面涉及抗體，其中所述抗體與氨基酸序列H₂N-GIATKGLNGP(SEQ ID NO:1)中包含的X型膠原α1的N末端新表位特異性結合。

優選地，抗體特異性結合N末端氨基酸序列H₂N-GIATKG(SEQ ID NO:2)。