[發(fā)明專利]具有改進(jìn)的精度和特異性的堿基編輯器

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880048366.2
• 申請(qǐng)日: 2018-05-25
• 公開（公告）號(hào): CN110959040A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·K·喬昂格;J·M·格爾克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 通用醫(yī)療公司
• 主分類號(hào): C12N15/00
• 分類號(hào): C12N15/00;C12N9/22;C12N9/78;C07K14/00
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種融合蛋白，其包含經(jīng)由任選的間插接頭與工程化變體脫氨酶hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3A、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G、或hAPOBEC3H連接的Cas9樣切口酶(nCas9)，所述工程化變體脫氨酶在脫氨酶的底物序列基序中包含表7、表8和/或表9中顯示的造成脫氨酶在非典型基序發(fā)揮作用的一個(gè)或多個(gè)突變，并且任選地其中所述融合蛋白還包含尿嘧啶糖基化酶抑制劑(UGI)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含表1或表2中列出的識(shí)別非同源序列基序的脫氨酶結(jié)構(gòu)域的工程化變體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3A、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G或hAPOBEC3H的工程化變體包含表7或表8中顯示的一個(gè)或多個(gè)突變。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3A、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G或hAPOBEC3H的工程化變體包含(i)表7和/或表8中顯示的一個(gè)或多個(gè)突變和(ii)表9中顯示的一個(gè)或多個(gè)突變。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3A、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G或hAPOBEC3H的工程化變體包含在N57、K60、和/或Y130中一處或多處具有突變的hAPOBEC3A；或者具有與N57、K60、或Y130對(duì)應(yīng)的突變的hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G、或hAPOBEC3H。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述工程化變體包含在N57和Y130處具有突變的hAPOBEC3A。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的融合蛋白，其包含具有N57G或N57Q突變；K60A或K60D突變；和/或Y130F突變中的一個(gè)或多個(gè)的hAPOBEC3A。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的融合蛋白，其中所述工程化變體包含具有與N57、K60對(duì)應(yīng)的突變和/或具有與Y130對(duì)應(yīng)的突變的hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G、或hAPOBEC3H。

9.根據(jù)權(quán)利要求5或7所述的融合蛋白，其包含具有與N57G；K60D；或Y130F對(duì)應(yīng)的一個(gè)或多個(gè)突變的hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G、或hAPOBEC3H。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的融合蛋白，其中hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3A、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G或hAPOBEC3H的工程化變體包含在A71和/或I96處具有突變的hAPOBEC3A；或者具有與A71和/或I96對(duì)應(yīng)的突變(例如，如表10中所示)的hAID、rAPOBEC1*、mAPOBEC3、hAPOBEC3B、hAPOBEC3C、hAPOBEC3F、hAPOBEC3G、或hAPOBEC3H。