[發(fā)明專利]用于分離和富集生物流體來(lái)源的細(xì)胞外囊泡的方法及其使用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880046403.6
• 申請(qǐng)日: 2018-07-12
• 公開（公告）號(hào): CN111133106A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M.舍爾;E.埃坦;C.科蒂基亞;J.斯科格;R.基欽;S.余
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 外來(lái)體診斷公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;G01N33/48;G01N33/53;G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 翟建偉;彭昶

1.方法，其包括：

a. 在足以在官能化的捕獲表面和至少一種細(xì)胞外囊泡(EV)細(xì)胞表面標(biāo)志物之間形成復(fù)合物的條件下，使生物樣品與所述官能化的捕獲表面接觸，其中所述捕獲表面用對(duì)于至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物特異性的試劑進(jìn)行官能化；

b. 將在所述官能化的捕獲表面和所述至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物之間形成的復(fù)合物與所述生物樣品的未結(jié)合部分分離以獲得捕獲的復(fù)合物，和保留捕獲的復(fù)合物；

c. 洗滌在所述官能化的捕獲表面和所述至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物之間形成的捕獲的復(fù)合物；

d. 通過(guò)重復(fù)步驟b.-c.來(lái)富集所述生物樣品內(nèi)具有至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物的EV的一個(gè)或多個(gè)亞群；和，

e. 如果使用多于一種細(xì)胞表面標(biāo)志物，則通過(guò)依次或同時(shí)進(jìn)行上述a.-d.步驟來(lái)分離和純化具有至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物的EV的一個(gè)或多個(gè)亞群。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物是核酸、蛋白、碳水化合物或脂質(zhì)。

3.權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)的方法，其中所述至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物存在于所述EV的表面上，或者其中所述生物標(biāo)志物從所述EV內(nèi)提取。

4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述對(duì)于至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物特異性的試劑包括抗體或抗體的混合物。

5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括定量EV的亞群中的至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物的存在。

6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物的存在與從所述生物樣品分離的亞群中的至少一個(gè)中的EV的數(shù)量直接相關(guān)。

7.權(quán)利要求6的方法，其中所述至少一種生物標(biāo)志物的存在使用轉(zhuǎn)錄組測(cè)定、蛋白質(zhì)組測(cè)定、定量PCR、納米串測(cè)定或微陣列來(lái)測(cè)定。

8.權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步包括步驟f.，從分離和純化的EV的亞群提取至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物。

9.權(quán)利要求8的方法，其中所述至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物選自具有或沒有任何修飾的α-突觸核蛋白、Tau、磷酸化Tau、SOD1、TDP43、感染性蛋白、HTT、SMA、淀粉樣蛋白β、突觸蛋白、簇蛋白和DRP1。

10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟：

g. 比較來(lái)自從受試者分離和純化的EV的亞群的至少一種靶標(biāo)生物標(biāo)志物的水平與一種或多種預(yù)定義閾值；和，

h. 如果所述至少一種生物標(biāo)志物的水平超過(guò)或不同于一種或多種預(yù)定義閾值，則將所述受試者鑒定為具有疾病或病況；和/或鑒定所述受試者中的疾病進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)；和/或?qū)⑺鍪茉囌哞b定為適合于療法。

11.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的方法，其中所述細(xì)胞表面標(biāo)志物是GluR2。

12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的方法，其中所述對(duì)于至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物特異性的試劑包括一種或多種維生素、蛋白、配體、凝集素、肽、寡核苷酸、適體或其任何組合。

13.權(quán)利要求1-7或10-12中任一項(xiàng)的方法，其中富集過(guò)程包括保留在所述試劑和來(lái)自所述生物樣品的至少一種細(xì)胞表面標(biāo)志物之間形成的復(fù)合物。

14.權(quán)利要求1-7或10-13中任一項(xiàng)的方法，其中所述生物樣品選自血液、血漿、血清、尿液、痰液、脊髓液、腦脊液、胸腔積液、乳頭抽吸液、淋巴液、呼吸道、腸道和泌尿生殖道的流體、淚液、唾液、母乳、來(lái)自淋巴系統(tǒng)的流體、精液、腦脊液、器官內(nèi)系統(tǒng)流體、腹水、腫瘤囊腫液、羊水及其組合。

15.權(quán)利要求1-7或10-14的方法，其中所述生物樣品是血漿或血清。