[發明專利]綴合度受控的生物綴合物、其制備方法及制備其的試劑

在審

• 申請號: 201880045297.X
• 申請日: 2018-07-06
• 公開（公告）號: CN111093712A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 謝爾蓋·科洛迪赫;奧列克桑德·科涅夫;阿蘭·瓦格納;伊戈爾·多夫甘
• 申請（專利權）人: 國家科學研究中心;斯特拉斯堡大學;辛迪維亞公司
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘海勝;宋琴芝

本發明涉及一種制備具有確定的綴合度(1?8)的蛋白質綴合物的異質單分散混合物的方法，所述蛋白質綴合物通過使用允許親和濃縮后進行隨后的同時釋放?官能化的三官能試劑來獲得。

本發明涉及生物綴合劑領域，例如抗體綴合物，其中抗體與一個或多個官能實體(本文稱為“有效載荷(payload)”)，特別是抗體藥物綴合物(ADC)綴合。

ADC是發展最快的一類腫瘤治療劑，因此一直受到廣泛關注。本妥昔單抗-維多汀和曲妥珠單抗-美坦新的批準為正在進行的臨床試驗鋪平了道路。

實際上，當前正在開發許多ADC候選物，預計大量處于后期臨床階段的ADC將作為不同物質的混合物而商業化。

當前開發的ADC實際上是不同物質的混合物，這意味著藥物抗體比(DAR，也稱為綴合度或DoC)遵循在樣品內的二項式分布。換句話說，與抗體綴合的藥物數量既不受控制也不確定，通常僅考慮平均藥物數量。

據報道，ADC設計的主要挑戰之一是ADC分子的均質性。上面提到的兩個已獲批準的ADC和正在開發的大多數ADC在以下方面是異質的，通常每個抗體中它們具有0至8個藥物分子(平均DAR為3至4)，并且據報道這可能會對綴合的藥物的藥代動力學、藥效動力學、體內性能/效率和/或治療窗口(副作用)產生不利影響(Bioconjugate Chemistry 2017,28,1371-1381)。Dovgan等人報告了即插即用(plug-and-play)的方法(BioconjugateChemistry，2017，第28卷，第1452-1457頁)。然而，作者使用的方法是即插即用的方法，盡管該方法使用單擊化學方法進行有效負載的連接，但是會產生具有不同DoC的綴合物異質混合物。因此，為了更好地控制ADC的綴合度和/或綴合位點，目前已經在該領域進行了更多的努力(Nature biotechnology,vol.33,7,694-696,2015)。

已經開發了用于控制DAR的方法，但是在大多數情況下，這需要單克隆抗體重新工程化、使用特定的酶或完全還原二硫鍵，然后對其進行重新橋聯。目前為止已開發的方法昂貴、復雜，并且在通用性和綴合度方面受到限制。因此，期望提供一種有效的方法來獲得具有受控的綴合度的ADC。

根據本發明，已經開發了完全基于化學反應的快速、簡便、最有效的方法，其可以實現：

-DNA或RNA綴合的抗體；

-多特異性抗體；

-多功能抗體；

-用于綴合的多功能抗體；

-用于由氨基酸(肽和蛋白質)組成的任何生物實體中的可能性；

-選擇任何綴合度的可能性；和/或

-選擇連接位點的可能性(例如蛋白質的半胱氨酸、賴氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸殘基)。

根據第一個目的，本發明涉及一種式(D-n)的區域異構DAR特異性蛋白質綴合物的混合物：

蛋白質-(G)_n

(D-n)

其中

n表示總綴合度(DoC)，并且為1至8的整數；

蛋白質是天然蛋白質或合成蛋白質或其片段；

(G)指在相同或不同的連接位點接枝到蛋白質上的相同或不同的綴合物片段，

條件是每個片段(G)具有各自的為1至8的綴合度i，其中∑(i)＝n

并且其中，每個片段(G)具有下式：

-Y-(Z₁)_p-P-(Z₃)_s-F

(G)