[發(fā)明專利]組成性產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A的細菌和利用細菌產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880045296.5
• 申請日: 2018-07-03
• 公開（公告）號: CN111492058A
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭學(xué)淑;池唯賢;安鎮(zhèn)守;權(quán)翊贊;楊恩卿
• 申請（專利權(quán)）人: 韓國科學(xué)技術(shù)研究院
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12P19/04;C12N9/14;C12N9/16
• 代理公司: 北京銘碩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11286
• 代理人: 陳宇;程月

組成性產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A(MLA)的細菌和通過使用該細菌產(chǎn)生MLA的方法可以簡單地產(chǎn)生MLA及其衍生物而不進行酸水解，降低了自然突變的可能性，并通過組成性表達MLA及其衍生物來增加MLA及其衍生物的產(chǎn)率。

技術(shù)領(lǐng)域

一個或更多個實施例涉及一種組成性產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A(MLA)的細菌和一種通過利用該細菌產(chǎn)生MLA的方法。

背景技術(shù)

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌中的圍繞肽聚糖的外膜的組分之一。LPS是包含脂質(zhì)A和通過共價鍵與脂質(zhì)A結(jié)合的多種多糖的分子。在LPS的組分中，脂質(zhì)A(也被稱為內(nèi)毒素)負責(zé)革蘭氏陰性菌的毒性。

脂質(zhì)A是非常有效的免疫系統(tǒng)刺激劑，以皮克每毫升的量激活細胞(例如，單核細胞或巨噬細胞)。例如，脂質(zhì)A的衍生物或脂質(zhì)A的變體可以用作諸如佐劑的疫苗的組分。單磷酰脂質(zhì)A(MLA)用作佐劑并且用于過敏原特異性免疫治療和癌癥的免疫治療，并且也已經(jīng)被報道對癡呆癥的預(yù)防和治療是有效的。在革蘭氏陰性菌(諸如大腸桿菌)的膜中發(fā)現(xiàn)的脂質(zhì)A與糖(諸如2-酮基-3-脫氧-D-甘露-辛酮糖酸(Kdo))結(jié)合。因此，可以通過從細菌的外膜提取LPS，在酸的存在下對LPS加熱，并且在碳酸鈉的存在下水解LPS，以去除Kdo和1-磷酸基團或酰基鏈，來產(chǎn)生MLA；或者可以通過化學(xué)合成方法來產(chǎn)生MLA。然而，這些方法涉及復(fù)雜的工藝，并且產(chǎn)率低。

當(dāng)通過利用基因工程方法將外源基因?qū)爰毦袝r，細菌會通過自然突變來消除外源基因而抑制外源基因的表達。這樣的自然突變會導(dǎo)致基因工程轉(zhuǎn)化效率和基因工程穩(wěn)定性的降低。

因此，需要開發(fā)一種產(chǎn)生MLA及其衍生物的方法，該方法比現(xiàn)有技術(shù)的方法簡單，不涉及酸水解，降低了使MLA產(chǎn)生減少的自然突變的可能性，并導(dǎo)致了MLA及其衍生物的組成型表達，從而提高了產(chǎn)率。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

一個或更多個實施例包括組成性產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A(MLA)的細菌。

一個或更多個實施例包括以高產(chǎn)率產(chǎn)生MLA的方法。

另外的方面將在下面的描述中部分地闡述，并且部分地將通過描述是明顯的，或者可以通過實踐給出的實施例而獲知。

根據(jù)一個或更多個實施例，提供一種細菌，該細菌組成性產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A(MLA)，其中，細菌包括LpxE多肽，并且細菌的染色體在編碼十一異戊烯基焦磷酸(酯)磷酸(酯)酶(undecaprenyl pyrophosphate phosphatase，Und-PP磷酸酶)的多核苷酸、編碼磷脂酰甘油磷酸(酯)磷酸(酯)酶(phosphatidylglycerophosphate phosphatase，PGP磷酸酶)的多核苷酸或其組合中包括突變。

根據(jù)一個或更多個實施例，一種產(chǎn)生單磷酰脂質(zhì)A(MLA)的方法包括：培養(yǎng)根據(jù)上述實施例中的任一個所述的細菌以獲得培養(yǎng)物；從培養(yǎng)物收集細菌；以及從收集的細菌分離MLA。

問題的解決方案

本申請要求于2017年7月5日在韓國知識產(chǎn)權(quán)局提交的第10-2017-0085406號韓國專利申請的權(quán)益，該韓國專利申請的公開內(nèi)容通過引用全部包含于此。