[發明專利]經純化的抗蠕蟲組合物及相關方法

在審

• 申請號: 201880041884.1
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN111148524A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 拉菲·萬·阿羅揚;加里·R·奧斯特羅夫
• 申請（專利權）人: 馬薩諸塞大學
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K38/16;A61P33/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 顧晉偉;劉振佳

描述了用于在對象中治療寄生性蠕蟲(parastitic worm)或蠕蟲(helminth)感染或者降低其發生之嚴重程度的組合物和方法。所述方法包括向所述對象施用治療有效量的組合物，所述組合物包含由單一類型的殺線蟲晶體蛋白形成的分離的天然生物活性殺線蟲晶體。所述分離的天然生物活性殺線蟲晶體基本上不含任何細菌芽孢或除晶體形式殺線蟲晶體蛋白之外的宿主細菌蛋白質。還描述了用于制備分離的天然生物活性殺線蟲晶體的方法。所述晶體蛋白可以是全長的、截短的、變體的或亞變體的Cry蛋白。晶體蛋白的一些實例包括Cry5B、Cry21、Cry14A、Cry6A和Cry13A。

聯邦政府資助的研究的聲明

本發明是在由美國衛生與公共服務部(Department of Health and HumanService，HHS)國立衛生研究院(National Institute of Health，NIH)授予的授權號NIAID5R01AI056189-13和由美國農業部(United States Department of Agriculture，USDA)國家糧食與農業研究所(National Institutes of Food and Agriculture，NIFA)授予的授權號NIFA2016-67015-24861的政府支持下完成的。政府在本發明中具有一定的權利。

相關申請

本申請要求于2017年5月23日提交的美國臨時專利申請序列號62/510,081的優先權，其內容通過引用并入本文中。

背景技術

寄生于人GI道的土壤傳播性蠕蟲(soil-transmitted helminth，STH)感染全世界23億最貧困的人和＞400,000,000最貧困的兒童。由土壤細菌蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis，Bt)產生的晶體(Crystal，Cry)蛋白是提供對STH的安全且有效治療的候選藥劑。然而，盡管Cry蛋白的抗蠕蟲生物活性已確立，但是向人和動物的胃腸(gastrointestinal，GI)道有效遞送完整的生物活性Cry蛋白用于治療STH仍存在重大的挑戰。Cry蛋白表達和純化的成本和可擴展性限制其在發展中國家作為實用性STH治療的應用，在發展中國家，治療必須可以以非常低的成本(低于$1/劑)和以非常大的量獲得以治療大且貧困的患者群體。

用于遞送Cry蛋白的便宜、簡單且可擴展的方式是將其在蘇云金芽孢桿菌(B.thuringiensis)中表達，蘇云金芽孢桿菌理想地適合于表達非常高水平的Cry蛋白，并且已將其便宜地大規模發酵用于環境釋放。然而，Bt中高水平Cry蛋白的產生需要芽孢形成。因此，目前部署到環境中的Cry蛋白組合物為包含來自細菌的晶體蛋白和芽孢二者的“芽孢-晶體裂解物”(spore-crystal lysate，SCL)的形式。由于存在在人中引起食物中毒的可包含許多腸毒素基因的細菌芽孢，在人中使用這些SCL組合物是有問題的。此外，Bt芽孢的包含使得制劑施用于人和動物都更加困難，因為芽孢難以處理，且效率更低，因為按重量計(gram-for-gram)任何制劑除活性成分(晶體)之外還必須包含顯著量的非活性成分(芽孢)。芽孢與晶體蛋白由于二者的尺寸非常類似而難以分離。

因此，在本領域中仍迫切需要用于將蛋白質治療劑(例如抗蠕蟲蛋白質)遞送至GI道的新方法。

發明概述

本公開內容基于以下發現：芽孢形成缺陷型或無芽孢形成能力的細菌可用于產生適合于藥用的殺線蟲晶體的高度純化的制劑。本發明的經純化的殺線蟲晶體制劑相對于從芽孢晶體裂解物(SCL)純化的晶體蛋白提供了更優的抗蠕蟲特性。此外，這樣的制劑基本上不含不適合于向人施用的污染性芽孢和宿主細菌蛋白質。在某些示例性實施方案中，制劑基本上不含可溶性細胞組分、脂質和細胞壁碎片。