[發(fā)明專利]包含脂肽(LP)化合物的非病毒基因遞送劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880041396.0
• 申請(qǐng)日: 2018-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110769862B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 科林·威廉姆·普頓;卡圖瓊·何;保羅·詹姆斯·懷特;凱瑟琳·索亞·布伊;納比拉·阿赫塔爾;哈雷斯·阿里·阿爾瓦西蒂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 莫納什大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K38/08;A61K47/10;A61K47/42;A61K47/14
• 代理公司: 廣州文冠倪律知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44348
• 代理人: 何錦標(biāo);楊婭莉

公開(kāi)了用于將核酸分子遞送或轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞的非病毒核酸遞送劑和方法。所述劑包含用于遞送的核酸貨物、一種或多種脂肽化合物和一種或多種聚合物電荷中和劑的復(fù)合物，并且所述復(fù)合物呈具有基本上為中性或負(fù)性的表面電荷的顆粒形式。所述劑和方法可以用于多種應(yīng)用中，諸如針對(duì)疾病和醫(yī)學(xué)病癥的療法(包括基因療法和核酸疫苗接種)。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開(kāi)涉及用于將核酸分子遞送或轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞以供諸如疾病和醫(yī)學(xué)病癥的療法(包括基因療法和核酸疫苗接種)的應(yīng)用的藥劑和方法。

優(yōu)先權(quán)文件

2017年6月13日提交的標(biāo)題為“Novel?gene?delivery?systems?2”的澳大利亞臨時(shí)專利申請(qǐng)第2017902238號(hào)的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容特此通過(guò)引用整體并入。

背景技術(shù)

出于多種原因，非常需要使用非病毒載體和藥劑將有用的核酸(例如寡核苷酸和多核苷酸)遞送或轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞，這些原因包括提高安全性(即相對(duì)于病毒載體，諸如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，其缺乏安全表達(dá)治療性基因而不干擾先天基因組活性所需的調(diào)控機(jī)制[1])、穩(wěn)定性和適用性用于“大量”藥物生產(chǎn)的潛力。在嘗試用于非病毒核酸轉(zhuǎn)移的策略中有非常簡(jiǎn)單的技術(shù)，即全身性施用大量質(zhì)粒DNA溶液(已發(fā)現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)高壓和質(zhì)粒外滲)；將質(zhì)粒(例如大的人工染色體)直接顯微注射到細(xì)胞中，這可以使質(zhì)粒與宿主基因組DNA穩(wěn)定融合；和電穿孔，這是一種流行且有用的轉(zhuǎn)染細(xì)胞用于體外研究的方法，其也已經(jīng)針對(duì)體內(nèi)動(dòng)物模型進(jìn)行工程化。然而，所有這些用于人類試驗(yàn)的實(shí)用性有限。

脂質(zhì)轉(zhuǎn)染，即核酸和陽(yáng)離子脂質(zhì)絡(luò)合形成稱為脂質(zhì)納米顆粒(LNP)的陽(yáng)離子顆粒，已經(jīng)用作另一種非病毒基因轉(zhuǎn)移工具的基礎(chǔ)。然而，與上面提到的策略一樣，其有用性主要限于細(xì)胞培養(yǎng)和一些簡(jiǎn)單的動(dòng)物模型，這主要是由于效率低以及隨之發(fā)生的有效高劑量的毒性所致[2]。然而，已經(jīng)批準(zhǔn)了使用脂質(zhì)-核酸納米顆粒復(fù)合物的幾種臨床試驗(yàn)，并且各種研究已試圖改變復(fù)合物的特征以降低毒性并獲得更大的組織特異性；例如，與體內(nèi)裸DNA復(fù)合物相比，通過(guò)用靜電吸附的基于聚(谷氨酸)的肽包衣包被復(fù)合物的外部，引起毒性降低[3]。在其它修改中，已經(jīng)使用了聚乙二醇(PEG)“屏蔽”或中和陽(yáng)離子顆粒的正電荷，所述正電荷會(huì)促進(jìn)與帶負(fù)電荷的血清蛋白的電締合，以及后續(xù)的調(diào)理作用和顆粒清除[4]。例如，在一些情況下，已通過(guò)核酸與陽(yáng)離子脂質(zhì)以及“聚乙二醇化”脂質(zhì)(諸如磷脂酰乙醇胺-PEG(PE-PEG)[5])的復(fù)合產(chǎn)生LNP，以改善生物分布和效率。然而，盡管在用于潛在治療用途的LNP的開(kāi)發(fā)方面取得了重大進(jìn)展，但仍有許多疑問(wèn)，包括擔(dān)心由于先天免疫激活[6]、降解和/或清除率低，所用陽(yáng)離子脂質(zhì)(通常是磷脂衍生物)在體內(nèi)可能難以良好耐受，特別是在較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)(例如長(zhǎng)時(shí)間或長(zhǎng)期使用基于LNP的治療劑)。

因此，持續(xù)需要鑒定和開(kāi)發(fā)用于將有用的核酸分子(諸如治療性核酸)遞送或轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞的改進(jìn)和/或替代的劑和方法。為此，本申請(qǐng)人尋求使用陽(yáng)離子脂肽(LP)代替陽(yáng)離子脂質(zhì)的替代策略。

顧名思義，脂肽包含與疏水性部分(例如脂質(zhì))綴合的肽。為了用作縮合劑，LP為陽(yáng)離子型，并因而，肽組分通常將包含氨基酸，諸如賴氨酸和精氨酸，由于其強(qiáng)堿性/正電荷性質(zhì)，這些氨基酸允許核酸分子諸如質(zhì)粒DNA在生理pH下縮合[7]。另外，該肽可包括據(jù)信組氨酸殘基也會(huì)通過(guò)促進(jìn)核酸的內(nèi)含體逃逸而提高轉(zhuǎn)染效率[8]的組氨酸殘基和/或可允許在肽分子之間形成二硫鍵的半胱氨酸殘基，，從而通過(guò)防止和脂肽在溶液中解離，來(lái)增強(qiáng)脂肽-核酸復(fù)合物的穩(wěn)定性[9]。據(jù)信脂肽的疏水性部分也有助于核酸-脂肽復(fù)合物的穩(wěn)定。典型的部分包括親脂鏈(例如硬脂酰基和膽固醇基)或非極性殘基重復(fù)?(例如纈氨酸)[10,11]。