[發明專利]用于免疫組化染色的過程記錄玻片

有效

• 申請號: 201880039196.1
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN110741302B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 弗雷德里克·克努特·哈舍;岑子祥
• 申請（專利權）人: 深圳市諾高實驗器材有限公司
• 主分類號: G02B21/34
• 分類號: G02B21/34;G01N33/53
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 熊永強

一種用于確定在試驗過程中，特別是多步免疫組化(IHC)試驗中石蠟去除、抗原修復以及使用的一級和二級染色試劑的效果的裝置和方法。所述裝置包括粘合劑涂覆的顯微鏡玻片，所述顯微鏡玻片包含以2D或3D結構作點涂并密封在石蠟涂層下的多種化合物。隨后，將組織切片或疏松細胞加到同一玻片上，并且全部經歷從組織捕獲到蓋玻片施加的IHC處理步驟。所述化合物與一級或二級IHC染色試劑反應，以記錄共存組織切片或疏松細胞的處理經歷。

相關申請的交叉引用

本申請要求2017年6月15日提交的標題為“用于免疫組化染色的過程記錄玻片”的美國臨時申請號62/520,319，2017年7月31日提交的標題為“用于免疫組化染色的過程記錄玻片”的美國臨時申請號US62/539,281，2017年6月15日提交的標題為“用于顯微鏡玻片蛋白質沉積物的屏蔽涂層”的美國臨時申請號62/520,169，2017年6月15日提交的標題為“免疫組化成像基線參考”的美國臨時申請號62/520,178，2017年6月15日提交的標題為“免疫組化抗原成像比例外推法”的美國臨時申請號US 62/520,187的優先權，其每一個公開的全部內容通過引用并入本文中。

技術領域

本發明涉及一種新型的過程記錄玻片。本發明特別涉及一種用于免疫組化的過程記錄玻片和染色方法。更特別地，本發明公開了一種過程記錄玻片，其為共存患者樣本提供了一起經歷染色過程的對照靶標。染色后，若有的話，染色對照立即顯示可能的錯誤，即與已知靶標基線的偏差。上述過程記錄玻片以具有成本效益的價格和易于接受的門檻，提供了高準確性和精度的高效質量控制。

背景技術

所有免疫組化的方法，以及其他免疫化學的方法，都是包括一系列的試劑交換、孵育和洗滌的多步程序。這些程序大多數需要訓練有素的人員，并且實驗室之間的結果可能有很大差異。采用成本節約、玻片制備一致并減少程序性人為錯誤的自動化系統已經開發出來。

對于自動化的和人工的方法，都有一些關鍵點需要考慮。必須小心以避免玻片上樣本損失。在試劑應用期間徹底洗滌樣本是非常必要的，特別是去除未結合的抗體，因為殘留物會被擴大。過量的液體必須去除，以避免先前試劑的遺留和/或隨后試劑不必要的稀釋，然而決不能讓樣本變干。必須使用足夠的抗體試劑以完全覆蓋樣本可能存在的玻片區域，但必須把浪費控制在最低限度。

此外，在免疫組化方法和免疫化學方法中使用的許多試劑，諸如酶溶液和過氧化物酶顯色劑，在工作溫度甚至室溫下具有有限的穩定性。這就需要經常制備試劑。此外，導致錯誤結果的非特異性抗體結合仍然是一個問題。

改善結果并最小化試劑制備的方法和試劑將促進人工和自動化的免疫組化方法。許多改進能夠容易地應用于相關的免疫化學方法，諸如酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、免疫熒光試驗和原位雜交。

可以參考“Use of cultured cells as a control for quantitativeimmunocytochemical analysis of estrogen receptor in breast cancer.The Quicgelmethod”，其公開了組織固定、處理和染色的變化是雌激素受體(ER)免疫組化試驗重復性差的主要原因。將具有已知ER含量的MCF-7細胞的冷凍瓊脂懸浮顆粒添加到55例浸潤性乳腺癌(IBC)樣本的每一個中作為對照。圖像分析確定MCF-7細胞和IBC陽性面積的百分比(陽性核/分析的總核)和陽性染色的百分比(陽性細胞核區域的光密度之和除以研究的所有核的光密度之和)。通過葡聚糖包裹活性炭分析，MCF-7細胞中ER的平均值為150fmol/mg。55例MCF-7細胞的圖像分析顯示平均陽性面積為70.81。IBC情況的陽性染色范圍為0到98.5。通過使用已知ER含量和陽性面積的MCF-7細胞，轉換因子用于將臨床樣本的陽性面積轉換為飛摩爾當量，55例IBC的陽性面積范圍為0到1790(平均值，187)。包含已知飛摩爾量的ER對照為質量控制和ER定量提供了內標。