[發(fā)明專利]用于純化源自人胚胎干細(xì)胞的內(nèi)胚層和胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880038434.7
• 申請(qǐng)日: 2018-06-14
• 公開（公告）號(hào): CN111094547A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: H·利克特;P·馬哈達(dá)卡爾;S·M·諾貝爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 德國亥姆霍茲慕尼黑中心健康與環(huán)境研究中心(有限公司);米特尼生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 北京瑞恒信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;丁磊

1.一種純化胰腺祖細(xì)胞的方法，包括：

(a)將源自多能干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和/或胚胎干細(xì)胞的包含胰腺祖細(xì)胞的細(xì)胞群暴露于結(jié)合胰腺祖細(xì)胞上的細(xì)胞表面標(biāo)志物的配體，其中所述細(xì)胞表面標(biāo)志物為CD177，和

(b)使所述胰腺祖細(xì)胞與源自多能干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和/或胚胎干細(xì)胞的不結(jié)合所述配體的細(xì)胞相分離，由此純化所述胰腺祖細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述胰腺祖細(xì)胞表達(dá)FOXA2、SOX17、CER1和/或CXCR4，優(yōu)選地表達(dá)CER1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，進(jìn)一步包括將所述細(xì)胞群暴露于結(jié)合CD51和/或CD275的配體的步驟。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述配體為抗體或其結(jié)合片段。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述配體與標(biāo)記綴合。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測(cè)所述標(biāo)志物的表達(dá)。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所述標(biāo)志物的表達(dá)。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述分離步驟包括親和色譜法。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述分離步驟包括流式細(xì)胞術(shù)。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述胰腺祖細(xì)胞為人的。

12.一種純化的組合物，包含至少50％的CD177陽性的胰腺祖細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述胰腺祖細(xì)胞被結(jié)合至配體，所述配體結(jié)合所述胰腺祖細(xì)胞上的CD177。

14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的組合物，其中所述胰腺祖細(xì)胞為人的。

15.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的組合物，其中將所述配體固定在捕獲介質(zhì)上。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法或組合物，其中所述捕獲介質(zhì)包括珠子。

17.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的組合物，其中將所述配體綴合至磁性試劑。

18.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過所述方法可獲得的所述純化的細(xì)胞組合物包含至少50％的胰腺祖細(xì)胞。

19.一種結(jié)合胰腺祖細(xì)胞上的細(xì)胞表面標(biāo)志物的配體用于從源自多能干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和/或胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞群中純化胰腺祖細(xì)胞的用途，其中所述細(xì)胞表面標(biāo)志物為CD177。

20.一種試劑盒，包含結(jié)合CD177的配體和用于將多能干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和/或胚胎干細(xì)胞分化為定形內(nèi)胚層細(xì)胞群的手段。

21.根據(jù)權(quán)利要求1至11或15至18中任一項(xiàng)所述的方法，或根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的組合物，或根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途，其中所述胰腺祖細(xì)胞其中所述胰腺祖細(xì)胞在細(xì)胞表面包含CD177。