[發(fā)明專利]細(xì)胞培養(yǎng)物的制造方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880024869.6
• 申請(qǐng)日: 2018-06-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110506109A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 大橋文哉;伊勢(shì)岡弘子;宮川繁;澤芳樹(shù)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 泰爾茂株式會(huì)社;國(guó)立大學(xué)法人大阪大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/10
• 代理公司: 11256 北京市金杜律師事務(wù)所
• 代理人: 楊宏軍;焦成美<國(guó)際申請(qǐng)>=PCT/JP

本發(fā)明的目的在于提供制造包含從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物的方法、及制造包含所述細(xì)胞培養(yǎng)物的片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的方法等。上述課題通過(guò)下述方法得以解決：制造包含從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物的方法，所述方法包括將細(xì)胞群以達(dá)到匯合的密度或其以上的密度接種的工序，所述細(xì)胞群是使從所述多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)為所述目標(biāo)細(xì)胞而得到的胚狀體分散而成的，其含有所述目標(biāo)細(xì)胞及相對(duì)于所述目標(biāo)細(xì)胞而言增殖速度相對(duì)更快的細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及制造包含從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物的方法、制造包含該細(xì)胞培養(yǎng)物的片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的方法、包含該細(xì)胞培養(yǎng)物或片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的組合物、移植片及醫(yī)療制品、使用了該目標(biāo)細(xì)胞培養(yǎng)物或片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的疾病的處置方法、以及用于制造該細(xì)胞培養(yǎng)物或片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的試劑盒等。

背景技術(shù)

近年來(lái)，為了修復(fù)損傷的組織等，進(jìn)行了移植各種細(xì)胞的嘗試。最近作為上述細(xì)胞的供給源而受到矚目的是從胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)等多能干細(xì)胞誘導(dǎo)而成的細(xì)胞。然而，嘗試從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)為目標(biāo)細(xì)胞的情況下，使全部細(xì)胞分化成目標(biāo)細(xì)胞在技術(shù)上是困難的，在從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的細(xì)胞群中，常常不僅包含目標(biāo)細(xì)胞，還包含其他種類的細(xì)胞。

對(duì)于提高細(xì)胞群中目標(biāo)細(xì)胞的比例的方法而言，在例如目標(biāo)細(xì)胞為心肌細(xì)胞的情況下，在特定的營(yíng)養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)的方法(非專利文獻(xiàn)1～2、專利文獻(xiàn)1)、用磁珠純化的方法(非專利文獻(xiàn)3)等是已知的。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：WO2007/088874

非專利文獻(xiàn)]

非專利文獻(xiàn)1：Park S.等，Cardiology 2013；124:139-150

非專利文獻(xiàn)2：Tohyama S.等，Cell Stem Cell 12,127-137,Jan 3,2013

非專利文獻(xiàn)3：Dubois,N.C.等，Nat.Biotechnol.29,1011-8(2011)

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的課題

本發(fā)明的目的在于，提供制造包含從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物的方法、制造包含該細(xì)胞培養(yǎng)物的片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的方法、包含該細(xì)胞培養(yǎng)物或片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的組合物、移植片及醫(yī)療制品、使用了該目標(biāo)細(xì)胞培養(yǎng)物或片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的疾病的處置方法、以及用于制造該細(xì)胞培養(yǎng)物或片狀細(xì)胞培養(yǎng)物的試劑盒等。

用于解決課題的手段

將從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的細(xì)胞用于移植的情況下，關(guān)鍵在于高效地得到以高比例含有目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞群。現(xiàn)有的提高目標(biāo)細(xì)胞的比例的方法雖然可提高目標(biāo)細(xì)胞的比例，但細(xì)胞的回收率低，不能說(shuō)所有方法都是有效的方法。

本申請(qǐng)發(fā)明人在對(duì)從多能干細(xì)胞高效地制備心肌細(xì)胞的方法開(kāi)展深入研究的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)將使胚狀體分散而成的細(xì)胞群以達(dá)到匯合的密度或其以上的密度接種培養(yǎng)時(shí)，令人驚訝地，心肌細(xì)胞的含有率高于接種前的細(xì)胞群，除此以外的細(xì)胞的含有率低于接種前的細(xì)胞群。于是基于上述發(fā)現(xiàn)繼續(xù)進(jìn)行研究，結(jié)果完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明涉及以下內(nèi)容。

＜1＞制造細(xì)胞培養(yǎng)物的方法，所述細(xì)胞培養(yǎng)物包含從多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)而成的目標(biāo)細(xì)胞，所述方法包括將細(xì)胞群以達(dá)到匯合的密度或其以上的密度接種的工序，所述細(xì)胞群是使從所述多能干細(xì)胞分化誘導(dǎo)為所述目標(biāo)細(xì)胞而得到的胚狀體分散而成的，其含有所述目標(biāo)細(xì)胞及相對(duì)于所述目標(biāo)細(xì)胞而言增殖速度相對(duì)更快的細(xì)胞。

＜2＞如上述＜1＞所述的方法，其中，達(dá)到匯合的密度是由于接觸抑制而實(shí)質(zhì)性地停止細(xì)胞的增殖的密度。