[發(fā)明專利]特異性肽網(wǎng)格蛋白抑制劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880023947.0
• 申請日: 2018-03-01
• 公開（公告）號: CN110869043A
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 奧列格·阿爾卡季耶維奇·科京;阿爾卡季·米哈伊洛維奇·科京;馬克西姆·奧列戈維奇·葉梅利亞諾夫
• 申請（專利權(quán)）人: 奧列格·阿爾卡季耶維奇·科京
• 主分類號: A61K38/08
• 分類號: A61K38/08;C07K7/06;A61P1/00;A61P3/10;A61P25/00;A61P31/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京銀龍知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘海勝;宋琴芝

本發(fā)明涉及化學(xué)和制藥工業(yè)。提出了使用合成肽作為特異性的網(wǎng)格蛋白抑制劑。還提出了一種預(yù)防或治療動物疾病或病癥的方法，包括給予有效量的肽或前藥或上述肽的生理上可接受的鹽或溶劑化物，或包含上述肽作為特異性的網(wǎng)格蛋白抑制劑的藥物組合物。該肽可用于醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)，以創(chuàng)造新的作為特定的網(wǎng)格蛋白抑制劑的藥物。

本發(fā)明涉及生物化學(xué)，更具體地，涉及作為網(wǎng)格蛋白的特異性抑制劑的生物活性肽，并且發(fā)現(xiàn)可以在醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)中作為預(yù)防或治療對網(wǎng)格蛋白的抑制有反應(yīng)或需要抑制網(wǎng)格蛋白的疾病和生理狀況的藥物而應(yīng)用。

如本文所用，術(shù)語“網(wǎng)格蛋白”是指細(xì)胞內(nèi)蛋白，其是在受體介導(dǎo)的胞吞作用期間形成的殼緣氣泡的主要成分[McMahon，Boucrot，2011]。在經(jīng)典的實(shí)施方式中，它由三個(gè)網(wǎng)格蛋白重鏈(-190kDa)組成，每個(gè)重鏈都與輕鏈(～25kDa)緊密相連。重鏈由兩個(gè)基因編碼：在第17號染色體(重鏈C17)上和在第22號染色體(重鏈C22)上。后者主要存在在肌肉中，而C17存在于網(wǎng)格蛋白的所有細(xì)胞中。但是，兩條重鏈具有高度的同源性(95％氨基酸序列重疊)和功能上的相同[Hood，Royle，2009]。聚合網(wǎng)格蛋白形成封閉的三維網(wǎng)絡(luò)，類似于球面，網(wǎng)格蛋白包被的囊泡大小約為100nm。囊泡形成并被膜囊泡分離后(在GTP酶發(fā)動蛋白的影響下)，網(wǎng)格蛋白包被的殼迅速解離網(wǎng)格蛋白，可再用于胞吞和胞吐。與特定受體配體的相互作用刺激了該過程[McMahon，Bocrot，2011]。至關(guān)重要的是，網(wǎng)格蛋白活性重鏈的關(guān)閉導(dǎo)致網(wǎng)格蛋白包被的復(fù)合物失去活性[Haarter，Harrison，Kirchhausen，2000]。結(jié)果，網(wǎng)格蛋白包被的胞吞細(xì)胞受體不僅下降，而且其他代謝產(chǎn)物：激素、神經(jīng)遞質(zhì)、各種蛋白質(zhì)也下降[Most等人，2003]。由于網(wǎng)格蛋白包被的細(xì)胞的胞吞作用的結(jié)果，還降低了不同的病原體如病毒、毒素和共生微生物。例如，肉毒桿菌神經(jīng)毒素和破傷風(fēng)神經(jīng)毒素是引起兩種嚴(yán)重疾病：破傷風(fēng)和肉毒中毒的細(xì)菌蛋白。它們的作用取決于神經(jīng)毒素通過胞吞作用進(jìn)入神經(jīng)末梢的神經(jīng)毒素的內(nèi)在作用[Pellett等人，2015]。

有多種藥物是網(wǎng)格蛋白的抑制劑。它們都有一個(gè)或其他缺陷，限制了它們在醫(yī)學(xué)中使用的可能性。

特別地，已知的合成制劑在其核心處具有可以結(jié)合具有至少一個(gè)或多個(gè)氨基酸(Ile52Ile62，Ile80，Phe91和/或Ile93)的末端結(jié)構(gòu)域網(wǎng)格蛋白的化合物(WO2013010218A9；Robertson等人，2014)。這些化合物的主要缺點(diǎn)是缺乏特異性[Willox，Sahraoui，Royle，2014]。

還已知網(wǎng)格蛋白肽的抑制劑Thr-Pro-Val-Leu-Glu-Thr-Pro-Lys-Leu-Leu-Leu-Trp(JP2009250552A)。但是，在這種情況下，提出的12元抑制劑序列不是直接的，因?yàn)槠渥畛跻种平Y(jié)合蛋白網(wǎng)格蛋白GRP78，其特征與網(wǎng)格蛋白無關(guān)。因此，該化合物的缺點(diǎn)也是缺乏特異性。此外，提出的序列僅由天然L-氨基酸組成，因此易受內(nèi)肽酶的作用，這限制了其在體內(nèi)使用的可能性。

為了通過實(shí)驗(yàn)克服這些缺點(diǎn)，確定了具有非麻醉型鎮(zhèn)痛作用的合成肽是網(wǎng)格蛋白的特異性抑制劑，其較早地得到專利RU2508295，US9260482(PCTWO/2013/141750，2013)的保護(hù)，對不同的給藥方法(枕骨下、肌內(nèi)、鼻內(nèi)以及(iv)在急性和強(qiáng)直性疼痛的不同模型中是有效的。

先前我們已經(jīng)證明，設(shè)計(jì)為通過與四環(huán)素測試結(jié)合而不會影響鈣代謝的肽序列沒有免疫作用，不會在溶液中形成原纖維，在存儲中穩(wěn)定并且制造和使用便宜(專利RU2508295)。

本發(fā)明要解決的問題是擴(kuò)大有效手段的范圍，是沒有副作用并通過簡單合成獲得的網(wǎng)格蛋白的特異性抑制劑。

通過以下事實(shí)解決了該問題：

為了獲得該結(jié)果，提出了使用通式(I)[SEQ ID NO:1]的合成肽

XDL-XDL1-XDL2-L-Lys-L-Leu-XDL3-L-Thr-R2(I)，其中：

XDL-不存在氨基酸或?yàn)長-Tyr，