[發明專利]用于基質制備的方法和組合物

在審

• 申請號: 201880019401.8
• 申請日: 2018-01-31
• 公開（公告）號: CN110446500A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 雪莉·L·沃伊提克-哈爾賓
• 申請（專利權）人: 格尼菲斯有限責任公司
• 主分類號: A61K38/39
• 分類號: A61K38/39;A61L27/24;C07K14/78
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 薛恒;王琳

本發明涉及制備基質的方法和用于這些方法的組合物。具體地，本發明涉及制備膠原基質的方法和用于這些方法的組合物，包括試劑盒和移植物組合物。

相關申請的交叉引用

本申請根據35 U.S.C.§119(e)要求2017年1月31日提交的美國臨時申請序列號62/452,564的優先權，其全部披露內容通過援引并入本文。

技術領域

本發明涉及制備基質的方法和用于這些方法的組合物。具體地，本發明涉及制備膠原基質的方法和用于這些方法的組合物，包括試劑盒和移植物組合物。

背景技術和發明內容

細胞外基質在組織和器官的功能中起關鍵作用，諸如細胞間通訊、胚胎形成期間的分化、傷口愈合、粘附以及細胞遷移和增殖。從天然來源獲得的或以合成方式制備的細胞外基質移植物構建體可以作為固體和可注射這兩種形式的組織移植物組合物用于體內組織重塑或用于體外應用，例如用于研究目的。細胞外基質的主要組分是膠原。一些溶解的膠原組合物(包括純化的膠原組合物)具有基質形成能力，并且也可以作為固體和可注射這兩種形式的組織移植物組合物用于體內組織重塑或用于體外用途。實際上，這種基于膠原的基質具有廣泛的研究和醫學應用，包括傷口和止血敷料、用作外科植入物、用作用于組織工程醫療產品的基材、用作治療性細胞或分子的遞送載體、以及用作用于基礎研究(包括藥物開發和毒性測試)的三維體外組織系統。

為了針對醫療和研究應用確保基于膠原的基質的高度生產一致性和用于制備基于膠原的基質的膠原的功能特性的低批次間差異，需要標準化過程和試劑以用于誘導膠原自組裝和用于定制基于膠原的基質。

因此，本發明人開發了一種穩健的方法，該方法使用用于膠原聚合的單個混合步驟，采用模擬生理條件的試劑，以支持如在體內觀察到的膠原的超分子自組裝。此外，本文所述的方法和方法中用到的試劑基于生理反應，諸如自組裝基質隨聚合反應中的膠原濃度而變化的粘彈性(例如，在振蕩剪切和基質剛度中測得的剪切儲能模量)。本文所述的方法和組合物產生基于膠原的基質，這些基質具有與涉及用于膠原聚合的多個混合步驟的常規多步驟聚合方法類似的性質，這些常規多步驟聚合方法包括將膠原組合物與緩沖溶液混合，然后與例如堿(諸如NaOH)混合以誘導聚合，然后任選地與其他試劑混合。本發明人開發的方法和組合物已經產生了對自組裝膠原基質的高度可預測且可再現的體外細胞和體內宿主反應。另一方面，本發明人開發了通過使用紫外線輻射對本文所述的膠原、膠原組合物、膠原基質、膠原溶液和凍干膠原進行滅菌同時保持聚合能力(例如，剪切儲能模量)的方法。聚合能力的保持與報道紫外線輻射會對膠原原纖維形成造成負面影響的先前研究相反(Mentor等人，Photodermatology,Photoimmunology&Photomedicine[光學皮膚病學、光學免疫學和光學醫學]，2001；Miyata等人，Biochem.Biophys.Acta[生物化學與生物物理學學報]，1971；Sudoh和Noda，Connect.Tissue Res.[結締組織研究]，1972)。在一個實施例中，提供了一種制備基質的方法。該方法包括使用單個混合步驟聚合膠原，包括將膠原組合物與緩沖溶液混合以形成膠原溶液，以及聚合該膠原溶液中的膠原以形成該基質。

在另一個實施例中，提供了一種制備基質的方法。該方法包括通過以下方式聚合膠原：將膠原組合物與緩沖溶液混合以形成膠原溶液，以及聚合該膠原溶液中的膠原以形成該基質，其中該緩沖溶液不含鎂離子或錳離子。

在又一個實施例中，提供了一種制備基質的方法。該方法包括使用單個混合步驟聚合膠原，該單個混合步驟包括將膠原組合物與緩沖溶液混合以形成膠原溶液，其中該膠原溶液中的膠原聚合以形成該基質。

在另外其他實施例中，提供了根據前述方法中的任一種制備的膠原基質。在又一個實施例中，提供了包含膠原組合物和緩沖溶液的試劑盒。在另一個實施例中，提供了包含凍干膠原、鹽酸溶液和緩沖溶液的試劑盒。

通過以下列舉的條款描述了若干另外的實施例。還設想了這些實施例的任何適用的組合。