[發明專利]一種體外糖基工程化紅細胞生成刺激蛋白的方法在審
| 申請號： | 201880019358.5 | 申請日： | 2018-03-16 |
| 公開（公告）號： | CN110446499A | 公開（公告）日： | 2019-11-12 |
| 發明（設計）人： | M·邁爾;M·托曼 | 申請（專利權）人： | 豪夫邁·羅氏有限公司 |
| 主分類號： | A61K38/18 | 分類號： | A61K38/18 |
| 代理公司： | 北京市中咨律師事務所 11247 | 代理人： | 陳迎春;黃革生 |
| 地址： | 瑞士*** | 國省代碼： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 紅細胞生成刺激蛋白 糖基工程化 轉移酶 種體 唾液酸轉移酶 半乳糖基 葡萄糖胺 唾液酸 乙酰基 生產 | ||
1.一種體外生產糖基工程化的紅細胞生成刺激蛋白的方法，包括以下步驟：
a)提供不含唾液酸的紅細胞生成刺激蛋白，
b)用N-乙酰基-葡萄糖胺轉移酶B3GNT2處理紅細胞生成刺激蛋白，
c)用半乳糖基轉移酶處理紅細胞生成刺激蛋白，
d)用唾液酸轉移酶處理紅細胞生成刺激蛋白。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟b)在錳離子和鈣離子存在下進行。
3.根據權利要求1或2所述的方法，步驟b)中紅細胞生成刺激蛋白和N-乙酰基-葡萄糖胺轉移酶B3GNT2之間的重量比為>1：1。
4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于該方法包括在步驟b)之后和用半乳糖基轉移酶處理之前純化獲得的紅細胞生成刺激蛋白的步驟。
5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于步驟c)在UDP-半乳糖存在下使用半乳糖基轉移酶GalT1進行。
6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于該方法包括在步驟c)之后和用唾液酸轉移酶處理之前純化獲得的紅細胞生成刺激蛋白的步驟。
7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于步驟d)使用唾液酸轉移酶ST3進行。
8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中不含唾液酸的紅細胞生成刺激蛋白包含相對頻率的N-連接聚糖，其包括2％-0％的唾液酸。
9.前述權利要求中任一項所述的方法用于增加紅細胞生成刺激蛋白的N-聚糖上聚-N-乙酰基乳糖胺重復的數量的用途。
10.權利要求1至8之一所述的方法用于提供紅細胞生成刺激蛋白的用途，所述紅細胞生成刺激蛋白的每個N-糖基化位點具有2個或更多個聚-N-乙酰基乳糖胺重復。
11.通過權利要求1至8中任一項所述的方法產生的體外糖基工程化的紅細胞生成刺激蛋白，其中每個紅細胞生成刺激蛋白的聚-N-乙酰基乳糖胺重復的平均數量大于10。
12.一種紅細胞生成刺激蛋白群，其特征在于每個N-糖基化位點上包含多于兩個聚-N-乙酰基乳糖胺重復的N-連接聚糖的相對頻率大于90％，并且其特征在于每個紅細胞生成刺激蛋白的聚-N-乙酰基乳糖胺重復的平均數量大于10。
13.根據權利要求12所述的紅細胞生成刺激蛋白群，其中所述紅細胞生成刺激蛋白群不含具有零個或一個聚-N-乙酰基乳糖胺重復的紅細胞生成刺激蛋白。
14.根據權利要求1至8之一所述的方法、根據權利要求9或10所述的用途、根據權利要求11所述的體外糖基工程化的紅細胞生成刺激蛋白、或根據權利要求12或13之一所述的紅細胞生成刺激蛋白群，其中所述紅細胞生成刺激蛋白是紅細胞生成素。
15.權利要求1至8之一所述的方法用于改善紅細胞生成刺激蛋白的比活性的用途。
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