[發明專利]新型整合位點及其用途

在審

• 申請號: 201880018555.5
• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN110431227A
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 孔令潔;R·雁如·蔡;遲秀玲
• 申請（專利權）人: 應用干細胞有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/00;C12N15/09;C12N15/11
• 代理公司: 北京市君合律師事務所 11517
• 代理人: 張怡;杜丹

1.一種哺乳動物細胞，所述哺乳動物細胞包含整合在所述細胞的基因組基因座內的外源性核酸序列，其中所述基因座包含延伸的無甲基化CpG島。

2.根據權利要求1所述的細胞，其中所述基因座是選自下組的基因組區域：核不均一核糖核蛋白A2(hnRNPA2)的啟動子和周圍區域、TATA結合蛋白(TBP)的啟動子和周圍區域、β-肌動蛋白的CpG島/啟動子和周圍區域以及PDCD2的CpG島/啟動子和周圍區域。

3.根據權利要求1所述的細胞，其中所述基因座包含與SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的核苷酸序列。

4.根據權利要求1所述的細胞，其中所述細胞是CHO細胞。

5.根據權利要求1所述的細胞，其中所述細胞是ES細胞或受精卵。

6.根據權利要求1所述的細胞，其中所述外源性核酸序列包含外源性目標基因(GOI)。

7.根據權利要求1所述的細胞，其中所述外源性核酸序列包含外源性啟動子。

8.根據權利要求1所述的細胞，其中所述外源性核酸序列編碼蛋白。

9.根據權利要求1所述的細胞，其中所述外源性核酸序列包含一個或多個重組酶識別序列。

10.根據權利要求9所述的細胞，其中所述重組酶識別序列選自下組：attP位點、attB、LoxP位點、Lox511位點、Lox2272位點、Lox2372位點、Lox5171位點、Loxm2位點、Lox71位點、Lox66位點、LoxFas位點、frt位點、由phiC31整合酶識別的位點、由Bxb1整合酶識別的位點和由Tn3整合酶識別的位點。

11.一種方法，所述方法包括：

將外源性核酸引入哺乳動物細胞，其中將所述外源性核酸整合至所述基因組的基因座，所述基因座包含延伸的無甲基化CpG島。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述基因座是選自下組的基因組區域：核不均一核糖核蛋白A2(hnRNPA2)的啟動子和周圍區域、TATA結合蛋白(TBP)的啟動子和周圍區域、β-肌動蛋白的CpG島/啟動子和周圍區域以及PDCD2的CpG島/啟動子和周圍區域。

13.根據權利要求11所述的方法，其中所述基因座包含與SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的核苷酸序列。

14.根據權利要求11所述的方法，其中所述細胞是CHO細胞。

15.根據權利要求11所述的方法，其中所述細胞是ES細胞或受精卵。

16.根據權利要求15所述的方法，還包括將所述細胞發育成生物體。

17.根據權利要求11所述的方法，其中所述外源性核酸包含外源性目標基因(GOI)。

18.根據權利要求17所述的方法，其中所述外源性核酸包含重組酶識別序列。

19.一種方法，所述方法包括：

(a)提供一種細胞，所述細胞包含整合在所述細胞的基因組基因座內的外源性核酸序列，其中所述外源性核酸序列包含與外源性啟動子可操作地連接的外源性GOI，和其中所述基因座包含延伸的無甲基化CpG島；和

(b)在能夠使所述外源性GOI表達的條件下培養(a)中的所述細胞。