[發明專利]單細胞人多潛能干細胞的傳代和收獲制劑

在審

• 申請號: 201880007148.4
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN110291189A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: J·A·羅利;Y·聶;T·費爾納;P·沃爾什;B·艾哈曼迪巴格巴德拉尼
• 申請（專利權）人: 隆薩沃克斯維爾股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;C12N5/0775
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;錢文宇

1.一種用于收獲和傳代單細胞人干細胞的制劑，所述制劑包含：

(i)1mM至約30mM檸檬酸鈉；

(ii)包含10mM至170mM KCl或NaCl的鹽；和

(iii)不含Ca2+/Mg2+的杜氏磷酸鹽緩沖鹽水(DPBS)；

其中，所述制劑的滲透壓為約100mOsmol/升至約350mOsmol/升。

2.如權利要求1所述的制劑，其中，所述制劑的滲透壓為約200mOsmol/升至約300mOsmol/升。

3.如權利要求1所述的制劑，其中，所述制劑的滲透壓為約250mOsmol/升至300mOsmol/升。

4.如權利要求1所述的制劑，其中，所述檸檬酸鈉的濃度為約5mMol/升至約15mMol/升。

5.如權利要求1所述的制劑，其中，所述鹽是KCl。

6.如權利要求5所述的制劑，其中，所述KCl的濃度為約40mMol/升至約150mMol/升。

7.如權利要求5所述的制劑，其中，所述KCl的濃度為約80mMol/升至約120mMol/升。

8.如權利要求1所述的制劑，其中，所述制劑的pH為約7至約8。

9.如權利要求1所述的制劑，其中，所述制劑的pH為約7.4和7.8。

10.如權利要求1所述的制劑，其基本上不含酶。

11.如權利要求1所述的制劑，其還包含人干細胞。

12.如權利要求11所述的制劑，其中，所述人干細胞選自：胚胎干細胞、體干細胞和誘導型多潛能干細胞。

13.如權利要求11所述的制劑，其中，所述人干細胞是誘導型多潛能干細胞。

14.如權利要求11所述的制劑，其中，所述人干細胞是選自下述的組織特異性干細胞：表皮干細胞，血液干細胞，造血干細胞，上皮干細胞，心臟干細胞和神經干細胞。

15.一種用于收獲和后續傳代人干細胞(hSC)的方法，所述方法包括：

在細胞培養板或容器中在權利要求1-12中任一項所述的制劑中孵育所述hSC約2分鐘至約20分鐘，其中所述hSC從所述細胞培養板或容器脫離成為具有約85％和約100％細胞活力的單細胞。

16.如權利要求15所述的方法，其中，細胞培養板或容器選自：皮氏培養皿，多孔細胞培養板，堆疊的細胞培養裝置，細胞培養工房或錐形管。

17.如權利要求16所述的方法，其中，在生物反應器、3D懸浮培養容器或錐形管中孵育所述hSC。

18.如權利要求15所述的方法，所述方法還包括：

所述單細胞的下游處理，其中下游處理選自：連續逆流離心技術，配制，自動化裝瓶，冷凍保存和高通量篩選，遺傳編輯和定向分化。

19.如權利要求15-18中任一項所述的方法，其中，所述人干細胞選自：胚胎干細胞、體干細胞和誘導型多潛能干細胞。

20.如權利要求15-18中任一項所述的方法，其中，所述人干細胞是誘導型多潛能干細胞。