[發明專利]一種長鏈多肽的純化方法

有效

• 申請號: 201880000485.0
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN110785427B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 尹傳龍;宓鵬程;陶安進;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K14/58
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種長鏈多肽的純化方法，其包括如下步驟：

1）純化步驟：采用兩根色譜柱串聯進行粗品的分離；

?步驟?1）中上游色譜柱填料為?粒徑10μm?的?C18?硅膠填料，下游色譜柱為?粒徑5μm的C18?硅膠填料；

步驟?1）流動相：A1?相為緩沖鹽溶液，其?pH?值為?2-3，所述緩沖鹽溶液為硫酸銨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀中的一種或幾種；B?相為有機相，所述的有機相為乙腈、甲醇、異丙醇和乙醇；緩沖鹽物質的量濃度為?20mM-150mM，檢測波長：230?nm；

步驟?1）包括以梯度洗脫：A1%：95%-55%，B%：?5%—45%，洗脫時間為30-120?分鐘；在洗脫過程中，當上游色譜柱的流出峰為雜質峰時棄去相應的流動相，當上游色譜柱的流出峰為目標峰時啟動在上下游色譜柱中間設置的三通混合器所連接的色譜泵，輸入純化水，進行在線稀釋，在線稀釋后目標峰進入下游色譜柱；

所述純化方法還包含作為轉鹽的步驟?2）：

步驟?2）采用步驟?1）中的上游色譜柱進行轉鹽，A2?相為體積比0.05%-0.2%的醋酸水溶液；B?相為有機相，所述的有機相為乙腈；檢測波長：230?nm；

步驟?2）包括：將步驟?1）得到的目標峰產物進行上樣；以?95%?A2?和?5%的B?沖洗?15-30min?進行脫鹽；

然后以梯度洗脫進行轉鹽，A2%：95%-55%，B%：?5%-45%，洗脫?10-30min，?收集目標產物；

所述的在線稀釋為目標峰進入下游色譜柱前，經過第三泵輸入?10%純化水，降低有機相比例；

所述的長鏈多肽為烏拉立肽。

2.一種長鏈多肽的純化方法，其包括如下步驟：

1）純化步驟：采用兩根色譜柱串聯進行粗品的分離；

步驟?1）中上游色譜柱填料為?粒徑10μm?的?C18?硅膠填料，下游色譜柱為?粒徑5μm的C18?硅膠填料；

步驟?1）流動相：A1?相為緩沖鹽溶液，其?pH?值為?8，所述緩沖鹽溶液為碳酸氫銨；B相為有機相，所述的有機相為乙腈、甲醇、異丙醇和乙醇；緩沖鹽物質的量濃度為?20mM-150mM，檢測波長：230?nm；

步驟?1）包括以梯度洗脫：A1%：95%-55%，B%：?5%—45%，洗脫時間為30-120?分鐘；在洗脫過程中，當上游色譜柱的流出峰為雜質峰時棄去相應的流動相，當上游色譜柱的流出峰為目標峰時啟動在上下游色譜柱中間設置的三通混合器所連接的色譜泵，輸入純化水，進行在線稀釋，在線稀釋后目標峰進入下游色譜柱；

所述純化方法還包含作為轉鹽的步驟?2）：

步驟?2）采用步驟?1）中的上游色譜柱進行轉鹽，A2?相為體積比0.05%-0.2%的醋酸水溶液；B?相為有機相，所述的有機相為乙腈；檢測波長：230?nm；

步驟?2）包括：將步驟?1）得到的目標峰產物進行上樣；以?95%?A2?和?5%的B?沖洗?15-30min?進行脫鹽；

然后以梯度洗脫進行轉鹽，A2%：95%-55%，B%：?5%-45%，洗脫?10-30min，?收集目標產物；

所述的在線稀釋為目標峰進入下游色譜柱前，經過第三泵輸入?10%純化水，降低有機相比例；

所述的長鏈多肽為薩摩魯肽或利拉魯肽。

3.根據權利要求?1?或?2?所述的純化方法，步驟?1）中上游色譜柱填長度為10-15cm，下游色譜柱長度為?10-15cm。

4.根據權利要求?1?或?2?所述的純化方法，步驟?1）包括以梯度洗脫：A1%：85%-65%，B%：?15%—55%，洗脫時間為?50-70?分鐘。

5.根據權利要求?1?所述的純化方法，A1?相?pH?值為?2.2-2.8。

6.根據權利要求?1?或?2?所述的純化方法，A2?相為體積比?0.1%-0.4%的醋酸銨溶液。

7.根據權利要求?1?或?2?所述的純化方法，步驟?2）以?95%?A2?和?5%?B?沖洗15-30min?進行脫鹽。

8.根據權利要求?1?或?2?所述的純化方法，步驟?2）以梯度洗脫進行轉鹽，A2%：85%-65%，B%：15%-35%，洗脫?10-30min，收集目標產物。