[發(fā)明專利]一種長鏈多肽的純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880000485.0
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN110785427B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹傳龍;宓鵬程;陶安進(jìn);袁建成
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K14/58
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

本發(fā)明提供了一種長鏈多肽的純化方法，其包括步驟1)，即純化步驟：采用兩根色譜柱串聯(lián)進(jìn)行粗品的分離，其中，上游色譜柱中填料的粒徑比下游色譜柱填料粒徑大；可選地，還包括作為轉(zhuǎn)鹽的步驟2)：采用步驟1)中的上游色譜柱進(jìn)行轉(zhuǎn)鹽，將步驟1)得到的目標(biāo)峰產(chǎn)物進(jìn)行上樣；以95％?85％的A2和5％?15％的B沖洗15?30min進(jìn)行脫鹽，其中，A2相為體積比0.05％?0.2％的醋酸水溶液，B相為有機相乙腈，檢測波長為230nm。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種長鏈多肽藥物的純化方法。

背景技術(shù)

Ularitide(烏拉立肽)是一種是由Cardiorentis(AG)開發(fā)的促尿鈉排泄環(huán)肽，它由32個氨基酸殘基，最初是在1988年由Schulz-Knappe等從尿液中分離得到的一種屬于心房鈉尿肽(atrialnatriureticpeptide，ANP)家族的腎利鈉肽，主要用于治療急性心力衰竭。

分子式如下：

流行病學(xué)資料顯示，目前全球心衰患者的數(shù)量已高達(dá)2250萬，并且仍以每年200萬的速度遞增。且5年存活率與惡性腫瘤相仿，20％的心衰患者出院將在30天內(nèi)再住院，花費了大量醫(yī)療費用。我國成年人心衰的患病率為0.9％，其中男性為0.7％，女性為1.0％，目前35～74歲成年人中仍約有400萬的心衰患者，并呈逐年上升趨勢。常見病因包括冠心病、高血壓、心肌病和(或)瓣膜病、糖尿病等，其中冠脈疾病是心力衰竭的重要原因。據(jù)統(tǒng)計，全球每年花費在心衰上的資金為1080億美元，2003年一項大型流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國內(nèi)地成年人心衰患病率已達(dá)0.9％，約有心衰患者450萬人。心衰分急性心衰和慢性心衰，美國過去10年中，因急性心衰而急診就醫(yī)者達(dá)1千萬例次。急性心衰患者中約15～20％為首診心衰，大部分則為原有的心衰加重，所有引起慢性心衰的疾病都可導(dǎo)致急性心衰。隨慢性心衰患者數(shù)量逐漸增加，慢性心功能失代償和急性心衰發(fā)作，也已成為心衰患者住院的主因，每年心衰的總發(fā)病率為0.23％～0.27％。急性心衰預(yù)后很差，住院病死率為3％，60d病死率為9.6％，3年和5年病死率分別高達(dá)30％和60％。急性心肌梗死所致的急性心衰病死率更高。急性肺水腫患者的院內(nèi)病死率為12％，1年病死率達(dá)30％，所以烏拉立肽市場前景廣闊。

現(xiàn)有多肽純化，主要是采用高效液相制備系統(tǒng)制備，有機相為乙腈、甲醇等，使用量較大，廢液排放量也較大。廢液回收難處理，危險性也較大，隨著肽序的延長，廢液排放量將會更龐大，純化周期也相應(yīng)變長，企業(yè)成本也較大。環(huán)保、安全和成本問題已經(jīng)制約著制藥企業(yè)的發(fā)展，急需要一種降低企業(yè)成本和廢液排放量的純化方法，最大限度的降低有機廢液儲存中的危險性。

烏拉立肽主要用于急性心衰，所以質(zhì)量顯得尤為重要。烏拉立肽肽序較長，中間還要經(jīng)過一步氧化，雜質(zhì)更多，為了提高藥物的安全性，現(xiàn)有多肽藥物純度要求也越高越好，大多要求純度大于99％，并需對單雜進(jìn)行控制，要求單雜小于0.10％，傳統(tǒng)純化過程達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)，一般需要經(jīng)過兩步純化，一步轉(zhuǎn)鹽，收率將會特別低；人力成本、環(huán)境成本以及產(chǎn)品成本都將較大。

對于多肽的純化主要是通過反相色譜純化，采用的固定相一般包括C18，C8，C4，C1等等，另外就是最近有些項目采用聚合物填料進(jìn)行純化甚至其它反相填料，但無論采用何種類型的填料，純化的過程基本無變化，基本過程有2種，一種通過高壓填裝同種填料制備柱，柱長一般25cm左右，粒徑大多為10μm，然后通過不同的色譜條件進(jìn)行純化，然后對不合格部分進(jìn)行回收，最終獲得合格的產(chǎn)品，另一種為高壓填裝不同類型填料的制備柱，通過柱長為25cm左右，粒徑一般為10μm，然后通過不同的色譜條件進(jìn)行純化，然后對不合格部分進(jìn)行回收純化，最終獲得合格的產(chǎn)品，對于肽序較短的多肽，以上兩種方式一般經(jīng)過一步純化即可完成，而對于肽序大于25個氨基酸的多肽產(chǎn)品，基本需要兩步純化，加上脫鹽或轉(zhuǎn)鹽，共需要三步才可以完成，兩種方式的缺點就是規(guī)模放大后，周期較長，另不合格中間體需要經(jīng)過多次回收才能得到合格產(chǎn)品，因為需要回收純化，周期延長，有機溶劑使用量變大，廢液排放也變多，最終產(chǎn)品的成本變高，質(zhì)量風(fēng)險和有機溶劑危險系數(shù)也變大。