[發(fā)明專利]一種減毒系統(tǒng)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880000349.1
• 申請(qǐng)日: 2018-04-26
• 公開（公告）號(hào): CN109312363B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁興祥;蘇建華;王美玲;童英;姚永超;秦莉;陳小平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中科藍(lán)華（廣州）生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/90;C12N1/11;A61K39/015;A61P33/06;C12R1/90
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 劉鍇;胡彬

本發(fā)明具體涉及一種減毒系統(tǒng)及其應(yīng)用，尤其涉及一種減毒及其用于瘧原蟲減毒的應(yīng)用，具體為一種EF1g基因用于瘧原蟲減毒的用途。所述減毒系統(tǒng)通過采用調(diào)控系統(tǒng)來調(diào)控EF1g基因的表達(dá)或降解，從而控制瘧原蟲的生長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)瘧原蟲的減毒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種減毒系統(tǒng)及其應(yīng)用，尤其涉及一種減毒及其用于瘧原蟲減毒的應(yīng)用。

背景技術(shù)

瘧疾與艾滋病以及結(jié)核病并列世界三大傳染病，瘧疾是一種由單細(xì)胞原生動(dòng)物瘧原蟲引起的，并由按蚊傳播的傳染疾病，寄生人體的瘧原蟲分為4種：惡性瘧原蟲(P.falciparum)、三日瘧原蟲(P.malariea)、間日瘧原蟲(P.vivax)以及卵形瘧原蟲(P.ovale)。95％的瘧疾死亡是由惡性瘧原蟲感染導(dǎo)致，其主要分布在撒哈拉沙漠以南的非洲區(qū)域。目前，用于瘧疾研究的動(dòng)物模型主要為鼠瘧及猴瘧模型。鼠瘧原蟲可分為夏氏瘧原蟲(P.chaubdi)、伯氏瘧原蟲(P.berghei)、約氏瘧原蟲(P.yoelii)及文氏瘧原蟲(P.vinckei)等。而猴瘧原蟲主要為諾氏瘧原蟲(P.knowlesi)以及石蟹猴瘧原蟲(P.cynomolgi)。

人瘧原蟲有人和按蚊兩個(gè)宿主，會(huì)在人體內(nèi)進(jìn)行無性繁殖和按蚊體內(nèi)進(jìn)行有性生殖。在人體內(nèi)經(jīng)歷肝期和紅內(nèi)期兩個(gè)階段，肝期進(jìn)行分裂生殖形成裂殖子，紅內(nèi)期會(huì)進(jìn)行分裂增殖，同時(shí)有部分形成配子體，配子體可以進(jìn)行有性生殖。成熟的瘧原蟲子孢子位于按蚊的唾液腺，按蚊叮咬人體的同時(shí)將子孢子注入人體血液。通過血液循環(huán)，幾分鐘內(nèi)，子孢子侵入肝臟細(xì)胞，并在肝臟細(xì)胞中進(jìn)行分裂增殖，經(jīng)過十到十二天的發(fā)育成熟后，裂殖體漲破肝細(xì)胞，釋放裂殖子進(jìn)入血液。一部分裂殖子繼續(xù)感染肝細(xì)胞，一部分侵入紅細(xì)胞，進(jìn)入紅內(nèi)期，剩下的大部分被吞噬細(xì)胞吞噬。侵入紅細(xì)胞的裂殖子繼續(xù)發(fā)育，經(jīng)歷環(huán)狀體、大滋養(yǎng)體、未成熟裂殖體和成熟裂殖體階段，成熟的裂殖體溢出紅細(xì)胞。這個(gè)階段的裂殖體不會(huì)入侵肝臟，部分裂殖體能夠繼續(xù)侵染紅細(xì)胞，部分經(jīng)過幾次分裂增殖后不再分裂，繼續(xù)發(fā)育形成雌或雄配子體。瘧疾病人體內(nèi)含有大量的瘧原蟲配子體，當(dāng)按蚊叮咬時(shí)，成熟的雌雄配子體進(jìn)入蚊胃，開始有性生殖。雌雄配子體進(jìn)一步發(fā)育成為雌雄配子，雌雄配子融合形成合子，進(jìn)一步發(fā)育成動(dòng)合子，動(dòng)合子入侵按蚊的胃壁，形成卵囊，隨后進(jìn)行無性生殖的孢子增殖階段。孢子增殖形成大量游離于卵囊子孢子，子孢子移動(dòng)到按蚊唾液腺中，進(jìn)入下一循環(huán)。

根據(jù)世界衛(wèi)生組織2016年12月公布的最新估算數(shù)據(jù)，2015年有2.12億起瘧疾病例，42.9萬人死亡。在2015年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)，全世界約有一半的人口面臨瘧疾的威脅，瘧疾主要發(fā)生在撒哈拉以及南非，另外在東南亞、拉丁美洲以及中東地區(qū)也有不同程度的威脅。在2015年的瘧疾統(tǒng)計(jì)中發(fā)現(xiàn)全球依然有91個(gè)國(guó)家以及地區(qū)有持續(xù)性的瘧疾流行，撒哈拉以南非洲地區(qū)瘧疾病例占全球瘧疾病例總數(shù)的90％，并占了瘧疾死亡總數(shù)的92％。同時(shí)在這些瘧疾的高傳播地區(qū)，5歲以下的兒童很容易感染瘧疾而得病，嚴(yán)重的甚至?xí)?dǎo)致死亡。超過70％的瘧疾死亡病例都是發(fā)生在5歲以下的兒童中，每?jī)煞昼娋陀幸幻麅和烙诏懠玻辕懠彩?歲以下兒童的頭號(hào)殺手。除了5歲以下兒童，嬰兒，孕婦以及艾滋病人等低免疫力人群都是瘧疾的高風(fēng)險(xiǎn)人群。

因此一種高效的瘧疾疫苗對(duì)于保護(hù)人類，消除瘧疾有很重大的意義。可是目前因?yàn)榀懺x的生活史復(fù)雜，抗原的成分多變，疫苗研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒煌晟频仍颍呙缪邪l(fā)的進(jìn)展不大。目前瘧疾疫苗主要分為：1、紅前期疫苗，如RTS，誘導(dǎo)針對(duì)環(huán)子孢子蛋白的抗體，具有比較好的臨床保護(hù)效果，但是保護(hù)力較低，只有25-50％。而其它紅前期的亞單位蛋白疫苗、DNA疫苗都沒有明顯的保護(hù)效果；2、紅內(nèi)期疫苗，是利用裂殖子表面抗原、侵入紅細(xì)胞相關(guān)抗原以及感染的紅細(xì)胞表面抗原開發(fā)的疫苗，目前針對(duì)MSP1以及AMA1開發(fā)的紅內(nèi)期亞單位疫苗都沒有明顯的保護(hù)效果；3、傳播阻斷疫苗，利用配子體或合子體表面抗原阻止配子的結(jié)合或合子的發(fā)育從而阻斷瘧疾傳播的疫苗，但是目前的傳播阻斷疫苗引起的抗體水平不高所以不具有實(shí)用價(jià)值；4、多階段多抗原疫苗，一種復(fù)合的抗原，如SP66，包含紅內(nèi)期抗原MSP1肽以及環(huán)子孢子蛋白CSP中間復(fù)制區(qū)，目前的臨床實(shí)驗(yàn)顯示沒有保護(hù)效果；5、全蟲疫苗，一種減毒的瘧原蟲活疫苗，包括放射減毒疫苗，基因減毒疫苗以及藥物減毒疫苗。