[發明專利]一種葡萄糖基轉移酶在生產乙基香蘭素-α-D-葡萄糖苷中的應用

有效

• 申請號: 201811653240.6
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109762794B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 陸躍樂;徐安杰;陳小龍;朱林江;陳翰馳;范永仙
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12P19/44;C12P19/18
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種源自樹蕨黃單胞菌(Xanthomonas arboricola)的葡萄糖基轉移酶在生產乙基香蘭素-α-D-葡萄糖苷中的應用，其特征在于所述的應用以含葡萄糖基轉移酶編碼基因的工程菌經發酵培養獲得的發酵液為菌劑，以麥芽糖和乙基香蘭素為底物，在pH值6.0-8.5、20-40℃條件下進行轉化反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得乙基香蘭素-α-D-葡萄糖苷；所述葡萄糖基轉移酶氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述麥芽糖質量濃度加入量以發酵液體積計為200-500g/L，所述乙基香蘭素質量濃度加入量以發酵液體積計為5-50g/L，所述發酵液中濕菌體含量為5-30g/L。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述菌劑按如下方法制備：將含葡萄糖基轉移酶編碼基因的工程菌接種到含卡那霉素50μg/L發酵培養基中，30-37℃培養4-6h；再加入終濃度為5.6-7.0mM的α-乳糖，22-25℃繼續發酵12-18h，取發酵液，即得到生產乙基香蘭素-α-D-葡萄糖苷的菌劑；所述發酵培養基組成：10g/L的蛋白胨、5g/L的酵母粉、54mM甘油、2.8mM葡萄糖、25mM Na₂HPO₄、25mM KH₂PO₄、50mM NH₄Cl、5mM Na₂SO₄、2mM MgSO₄，溶劑為去離子水，pH7.0。

4.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述工程菌在發酵前先進行種子活化培養，再將種子液以體積濃度1-5％的接種量接種至發酵培養基，所述種子活化培養為：將含葡萄糖基轉移酶編碼基因的工程菌接種在含有35μg/ml氯霉素和50μg/ml卡那霉素的種子培養基中，37℃培養至對數生長中期，獲得種子液；所述種子培養基組成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄ 0.71g/L、MgSO₄·7H₂O0.49g/L，溶劑為去離子水，pH7.0。

5.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述轉化反應是在發酵罐中進行連續補料反應：將發酵液加入發酵罐中，加入質量終濃度0.05％消泡劑，在pH值6～8.5、20-40℃條件下進行催化轉化反應；在反應開始30min后，每隔20min補料乙基香蘭素；反應完全后，將反應液分離純化，獲得乙基香蘭素-α-D-葡萄糖苷。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述乙基香蘭素每次加入量為總添加質量的0.3-0.7％。