[發(fā)明專利]一種固定化胰蛋白酶的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811647905.2
• 申請日: 2018-12-30
• 公開（公告）號: CN109762805A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 史百鳴;王運龍;盧雪峰;李國瑩;陸瑞琪
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇一鳴生物股份有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 蘇州國卓知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32331
• 代理人: 明志會

1.一種固定化胰蛋白酶的方法，包括以下步驟：

步驟一：選擇固定化胰蛋白酶的材料40-50份，醋酸水溶液50-100份，將固定材料加入醋酸水溶液中，調(diào)至到所需濃度，用高速攪拌機(jī)高速攪拌混勻至形成透明粘稠的均一體系溶液，得到第一溶液，靜置20-30min除去氣泡；

步驟二：在獲得的第一溶液中加入20-30份粒徑為10μm的二氧化硅球，調(diào)制濃度是5%，用攪拌棒慢慢攪拌至小球分散均勻，得到第二溶液，減少氣泡的形成；

步驟三：將第二溶液通過內(nèi)徑1mm的管道逐滴滴入含12%氫氧化鈉、20%乙醇的水溶液中，滴入的液滴在水溶液中會逐漸形成白色的小球，剛滴入時浮在液面處，后逐漸沉入底部，得到小球A；

步驟四：取50-100份的5%氫氧化鈉溶液置于量杯中，并將氫氧化鈉溶液加熱至80℃，用儀器取出小球A置于量杯中，恒溫反應(yīng)2h-4h，促進(jìn)小球A中的二氧化硅溶解，形成孔道，得到小球B；

步驟五：取出小球B將其放入清水中清洗至洗滌液為中性為止，得到小球C；

步驟六：取出小球C放入30%甘油溶液中充分浸泡1h-2h，得到小球D；

步驟七：取一個烤箱調(diào)節(jié)溫度至40℃，取出小球D，置于烤箱中烘干10h-20h，得到小球E；

步驟八：稱取1g的小球E，按每克小球E，每5ml的戊二醛溶液的量加入戊二醛溶液修飾表面基團(tuán)，反應(yīng)避光進(jìn)行 2h-4h，避免戊二醛的自我交聯(lián)，修飾結(jié)束后將小球取出，用清水洗滌5-10遍，去除多余的戊二醛，獲得的小球稱為小球F；

步驟九：將小球F加入胰蛋白酶液中，在4℃條件下固定2h-5h，固定完成后用pH=8.0的緩沖液沖洗3-5次，得到固定化胰蛋白酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟一中固定化胰蛋白酶的材料是殼聚糖，脫乙酰程度大于90%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟一中將固定材料加入醋酸水溶液中，調(diào)節(jié)到所需的濃度為5%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟六中30%甘油溶液的作用為使小球C 充分吸收甘油，在烘干的過程中不會發(fā)生塌縮的現(xiàn)象。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化胰蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟八中戊二醛溶液的濃度為1%。